【目的】利用原核表達系統(tǒng)表達鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)的NS3蛋白,并以此制備鼠抗NS3蛋白的多克隆抗血清。【方法】利用PCR擴增鴨坦布蘇病毒CQW1株NS3基因片段,然后將其克隆到pET-28a(+)載體,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a(+)-NS3。將重組表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21感受態(tài)細胞中,篩選獲得陽性重組菌,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達,通過SDS-PAGE和Western blot試驗表明重組NS3蛋白在BL21細胞中成功表達,將重組NS3蛋白切膠純化后免疫小鼠后收獲抗血清。【結(jié)果】經(jīng)間接免疫熒光試驗和Western blot試驗驗證,多克隆抗血清可識別病毒感染細胞過程產(chǎn)生的NS3蛋白和真核表達的NS3蛋白,具有良好的反應(yīng)性和特異性�！窘Y(jié)論】成功制備的DTMUV NS3蛋白的鼠源多克隆血清,將為鴨坦布蘇病毒的臨床檢測和NS3蛋白功能性研究奠定基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 試驗材料
    1.2 主要試劑
    1.3 擴增NS3基因引物設(shè)計與合成
    1.4 NS3基因的克隆及載體的構(gòu)建
    1.5 重組NS3蛋白的誘導(dǎo)表達與SDS-PAGE鑒定
    1.6 重組NS3蛋白鼠源多克隆抗血清的制備
    1.7 Western Blot試驗
    1.8 IFA試驗
2 結(jié)果與分析
    2.1 表達載體p ET-28a(+)-NS3的構(gòu)建與表達
    2.2 重組蛋白的純化與免疫
    2.3 NS3多克隆抗血清的Western blot檢測結(jié)果
    2.4 NS3多克隆抗血清IFA檢測結(jié)果
3 討論與結(jié)論



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