旨在建立一種可視化多重熒光RT-LAMP方法用于檢測小反芻獸疫病毒和藍舌病病毒的核酸,并初步應用于小反芻獸疫和藍舌病臨床樣品的檢測。比對GenBank中小反芻獸疫N基因和藍舌病NS3基因保守區(qū)域,設(shè)計2套LAMP引物,在每條內(nèi)引物FIP的5′端標記熒光基團。對反應條件進行優(yōu)化,驗證方法的特異性、靈敏度和干擾性,同時應用該方法檢測168份臨床樣品。結(jié)果表明,該方法對小反芻獸疫病毒和藍舌病病毒高度特異,與口蹄疫病毒、鹿流行性出血熱病毒、牛瘟病毒、山羊痘病毒等其他反芻動物病毒均無交叉反應,檢測靈敏度為200 copies/μL,干擾性小,可同時檢測兩個不同濃度的模板。對168份樣品的檢測結(jié)果顯示,小反芻獸疫病毒的感染率為3.6%,藍舌病病毒的感染率為13.1%,無兩種病毒混合感染;與熒光RT-PCR方法相比,此多重熒光RT-LAMP方法敏感性為91.7%～100%,特異性為100%。表明建立的多重熒光RT-LAMP可快速、準確地檢測小反芻獸疫病毒和藍舌病病毒,具有較好的臨床應用價值。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 毒株來源
        1.1.2 主要試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 引物設(shè)計
        1.2.2 標準品的制備
        1.2.3 多重熒光RT-LAMP反應
            (1)核酸抽提
            (2)RT-LAMP反應
        1.2.4 干擾性試驗
        1.2.5 臨床樣品的檢測
2 結(jié)果
    2.1 特異性試驗結(jié)果
    2.2 敏感性試驗結(jié)果
    2.3 干擾性試驗結(jié)果
    2.4 臨床樣品的檢測
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