禽致病性大腸桿菌(Avian Pathogenic Escherichia coli,APEC)能引起禽類高死亡率給養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展帶來重大危害。存在于APEC中的PhoP/Q二元調(diào)控系統(tǒng)是由菌體外膜蛋白PhoQ感應(yīng)外界環(huán)境變化,繼而將信號傳遞給PhoP,PhoP能夠調(diào)控病原菌毒力基因表達,這對菌體侵襲機體上皮細胞導(dǎo)致機體致病起著關(guān)鍵作用。探索PhoQ介導(dǎo)PhoP調(diào)控的APEC毒力基因靶點,針對APEC檢測受PhoP調(diào)控的外膜蛋白、內(nèi)毒素等毒力相關(guān)基因,為后續(xù)進一步明確PhoP/Q調(diào)控系統(tǒng)對APEC毒力的影響奠定了基礎(chǔ)。為探討由PhoQ介導(dǎo)的PhoP對毒力基因的調(diào)控作用,本實驗從基因調(diào)控角度入手通過禽致病性大腸桿菌phoP/Q基因的原核表達獲得其蛋白產(chǎn)物,檢測受PhoP蛋白調(diào)控的毒力相關(guān)基因;同時,得到了PhoQ蛋白為實驗室對PhoQ的研究提供了材料。本實驗為后續(xù)進一步研究PhoP/Q二元調(diào)控系統(tǒng)對禽致病性大腸桿菌毒力的調(diào)控功能和作用機理提供一些參考。具體內(nèi)容和結(jié)果如下:1禽致病性大腸桿菌PhoP/Q蛋白的表達根據(jù)NCBI中報道的APEC phoP/Q基因編碼區(qū)序列(GenBank登錄號C...

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
文獻綜述
引言
主要技術(shù)路線
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
        1.1.1 菌株與載體
        1.1.2 主要工具酶及試劑盒
        1.1.3 其他相關(guān)試劑
        1.1.4 標準參照物
        1.1.5 緩沖液的配制
        1.1.6 儀器設(shè)備
    1.2 實驗方法
        1.2.1 目的基因的合成
        1.2.2 表達載體pET32a-phoP/Q的構(gòu)建
        1.2.3 重組PhoP蛋白的誘導(dǎo)表達
        1.2.4 重組PhoP蛋白的Ni-NTA純化
        1.2.5 重組PhoQ蛋白的誘導(dǎo)表達
        1.2.6 重組PhoQ蛋白的Ni-NTA純化
        1.2.7 禽致病性大腸桿菌PhoP蛋白與毒力基因的相關(guān)性分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 表達載體pET32a-phoP/Q的構(gòu)建
    2.2 重組PhoP蛋白的誘導(dǎo)表達
        2.2.1 重組PhoP蛋白的IPTG誘導(dǎo)表達
        2.2.2 重組PhoP蛋白誘導(dǎo)溫度的優(yōu)化
        2.2.3 重組PhoP蛋白IPTG誘導(dǎo)濃度的優(yōu)化
    2.3 重組PhoP蛋白的Ni-NTA純化
    2.4 重組PhoQ蛋白的誘導(dǎo)表達
    2.5 重組PhoQ蛋白的Ni-NTA純化
    2.6 禽致病性大腸桿菌PhoP蛋白與毒力基因的相關(guān)性分析
        2.6.1 禽致病性大腸桿菌毒力相關(guān)基因的獲得
        2.6.2 禽致病性大腸桿菌PhoP與毒力相關(guān)基因啟動子的結(jié)合檢測分析
3 討論
    3.1 禽致病性大腸桿菌phoP/Q基因的序列分析
    3.2 表達菌株和載體的選擇
    3.3 禽致病性大腸桿菌PhoP/Q重組蛋白的表達及純化
    3.4 禽致病性大腸桿菌PhoP蛋白與毒力基因的相關(guān)性分析
    3.5 本實驗的安排依據(jù)及后續(xù)研究
4 結(jié)論
參考文獻
致謝
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