母雞的產(chǎn)蛋性能是家禽生產(chǎn)中的一個重要指標,與母雞卵巢的發(fā)育密切相關。卵巢發(fā)育是一個動態(tài)的、受多種因子調(diào)控的復雜過程,但其中具體的因素及其作用機制仍不清楚。在哺乳動物中FOXL2(Forkhead box L2,叉頭蛋白L2)一直被認為是控制雌性正常生殖生理的關鍵因子,同時也被認為是卵巢發(fā)育過程中重要的基因,若其發(fā)生突變將會造成卵巢早衰等不孕癥甚至癌癥。本研究以FOXL2為研究對象,通過分別在雞卵巢poGC(Pre-ovulatory follicle granulosa cells,排卵前卵泡顆粒細胞或稱等級卵泡顆粒細胞)和phGC(Pre-hierarchical follicle granulosa cells,等級前卵泡顆粒細胞或稱小黃卵泡顆粒細胞)中敲低FOXL2基因的表達,結合轉錄組測序獲取轉錄基因的變化情況,研究FOXL2在雞卵泡選擇與卵泡發(fā)育過程中參與的生物學過程與調(diào)控作用。主要的研究結果如下:1.設計并合成三條特異性靶向FOXL2基因的siRNA,利用脂質(zhì)體在原代培養(yǎng)的雞卵巢排卵前卵泡顆粒細胞中分別轉染不同的siRNA或NC-siRNA,24h后檢測FOXL2基因在mR...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
    1.1 研究問題的由來
    1.2 文獻綜述
        1.2.1 雞的卵泡發(fā)育
        1.2.2 顆粒細胞在卵巢卵泡選擇與發(fā)育中的作用
        1.2.3 FOXL2 及其編碼基因
        1.2.4 FOXL2 基因的表達與分布特點
        1.2.5 FOXL2 的功能
        1.2.6 RNAi技術及其在基因功能研究中的應用
        1.2.7 轉錄組測序技術
    1.3 目的與意義
    1.4 研究技術路線
2 試驗材料與方法
    2.1 試驗材料
    2.2 主要儀器、試劑和溶液配制
        2.2.1 主要儀器與設備
        2.2.2 主要試劑和試劑盒
        2.2.3 溶液配制
    2.3 試驗方法
        2.3.1 雞顆粒細胞的分離與原代培養(yǎng)
        2.3.2 在雞顆粒細胞中敲低FOXL2 表達
        2.3.3 細胞總RNA的提取和qPCR
        2.3.4 總蛋白提取及Western Blot驗證
        2.3.5 轉錄組測序及差異表達基因分析
        2.3.6 細胞增殖、DNA復制、凋亡及細胞周期檢測
    2.4 生物信息學分析相關軟件和數(shù)據(jù)庫
        2.4.1 生物統(tǒng)計學分析
        2.4.2 生物信息學分析相關軟件
        2.4.3 數(shù)據(jù)庫
3 結果與分析
    3.1 在雞顆粒細胞中敲低FOXL2 表達
        3.1.1 雞顆粒細胞總RNA提取
        3.1.2 cDNA質(zhì)量檢測
        3.1.3 轉染不同siRNA對 FOXL2 基因表達量的影響
        3.1.4 轉染不同時間FOXL2 蛋白的相對表達量
    3.2 轉錄組測序及分析
        3.2.1 測序樣本的敲低效果及總RNA質(zhì)量檢測
        3.2.2 轉錄組測序數(shù)據(jù)評估
        3.2.3 DEGs篩選
        3.2.4 部分DEGs驗證
        3.2.5 DEGs功能分析
    3.3 FOXL2 對雞顆粒細胞細胞行為的影響
        3.3.1 細胞增殖
        3.3.2 細胞DNA復制
        3.3.3 細胞凋亡
        3.3.4 細胞周期
4 討論
    4.1 FOXL2 在雞顆粒細胞中的作用與調(diào)控的基因
    4.2 FOXL2 對顆粒細胞的細胞增殖等行為的影響
    4.3 轉染實驗
5 小結
    5.1 本研究得到的結果
    5.2 本研究中的創(chuàng)新點
    5.3 本研究的不足之處
    5.4 本研究的下一步計劃
參考文獻
致謝



本文編號：3852164