氨基酸不僅是蛋白質(zhì)合成的底物,而且能夠作為生物信號(hào)直接調(diào)控蛋白質(zhì)的合成。本團(tuán)隊(duì)前期試驗(yàn)表明,在低蛋白日糧條件下,補(bǔ)飼過瘤胃Met或同時(shí)補(bǔ)飼4種過瘤胃必需氨基酸Met,Leu,Ile和Thr均能夠顯著提高奶牛乳產(chǎn)量、乳蛋白合成量以及氮泌乳轉(zhuǎn)化效率。但Met通過何種途徑起作用,目前尚不明確。本文以泌乳小鼠為模型,研究Met對(duì)泌乳小鼠乳產(chǎn)量、乳蛋白合成的影響及影響途徑,以期為信號(hào)氨基酸調(diào)控理論積累數(shù)據(jù),并為研究在奶牛上有推廣價(jià)值的補(bǔ)飼方案提供試驗(yàn)依據(jù)。試驗(yàn)選取48只分娩日期相近(17¹9d)的SPF昆明清潔級(jí)雌性孕小鼠,隨機(jī)分為4個(gè)處理組,每組12只,單籠飼喂。從分娩當(dāng)天開始分別飼喂四種日糧:低蛋白日糧(LP,日糧蛋白水平為16%),高蛋白日糧(HP,日糧蛋白水平為21%),低蛋白日糧添加1倍Met(M1,添加1.86 g Met)或2倍Met(M2,添加3.72 g Met)。日糧等能配制,飼喂17天,觀察對(duì)泌乳小鼠采食量、仔鼠窩增重、乳蛋白產(chǎn)量、血漿AA濃度、激素濃度以及乳腺mTOR信號(hào)通路的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明,HP組、LP組、M1組和M2組之間泌乳小鼠的采食量、仔...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
符號(hào)說明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 泌乳奶牛氮轉(zhuǎn)化效率
        1.1.1 蛋白質(zhì)與氨基酸平衡理論
        1.1.2 奶牛氮利用效率
    1.2 日糧補(bǔ)飼蛋氨酸的研究進(jìn)展
    1.3 乳蛋白質(zhì)的合成
        1.3.1 乳腺結(jié)構(gòu)與發(fā)育
        1.3.2 乳蛋白的合成
    1.4 影響乳蛋白合成的因素
        1.4.1 營養(yǎng)因素
            (1)能量水平
            (2)蛋白質(zhì)水平
            (3)氨基酸
        1.4.2 內(nèi)分泌因素
    1.5 調(diào)控乳蛋白合成的信號(hào)途徑
    1.6 研究目的意義及研究內(nèi)容
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試驗(yàn)儀器
        2.1.3 主要試驗(yàn)試劑
        2.1.4 主要試劑配制
    2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.1 試驗(yàn)處理
        2.2.2 樣品采集及測(cè)定指標(biāo)
            2.2.2.1 樣品采集
            2.2.2.2 測(cè)定指標(biāo)
    2.3 測(cè)定方法
        2.3.1 血漿指標(biāo)的測(cè)定
            2.3.1.1 血漿生化指標(biāo)的測(cè)定
            2.3.1.2 血漿激素指標(biāo)的測(cè)定
            2.3.1.3 血漿氨基酸的測(cè)定
        2.3.2 組織基因檢測(cè)
            2.3.2.1 RNA提取與純度鑒定
            2.3.2.2 cDNA的合成
            2.3.2.3 實(shí)時(shí)熒光相對(duì)定量PCR
            2.3.2.4 數(shù)據(jù)處理
        2.3.3 組織蛋白檢測(cè)
            2.3.3.1 組織蛋白的提取
            2.3.3.2 組織蛋白濃度的測(cè)定
            2.3.3.3 蛋白變性
            2.3.3.4 Western Blotting
            2.3.3.5 灌膠
            2.3.3.6 SDS-PAGE電泳
            2.3.3.7 轉(zhuǎn)膜
            2.3.3.8 剪膜及免疫反應(yīng)
            2.3.3.9 顯影
            2.3.3.10 數(shù)據(jù)處理
    2.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)
3 結(jié)果與分析
    3.1 普通瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)乳腺組織總RNA的完整性
    3.2 低蛋白日糧添加Met對(duì)泌乳小鼠采食量以及仔鼠窩增重的影響
    3.3 低蛋白日糧添加Met對(duì)乳腺β-casein基因表達(dá)的影響
    3.4 低蛋白日糧添加Met對(duì)泌乳小鼠血漿生化指標(biāo)的影響
    3.5 低蛋白日糧添加Met對(duì)泌乳小鼠血漿氨基酸濃度的影響
    3.6 低蛋白日糧添加Met對(duì)泌乳小鼠血漿激素水平的影響
    3.7 低蛋白日糧添加Met對(duì)乳腺mTOR途徑相關(guān)信號(hào)分子mRNA、總蛋白及磷酸化水平的影響
4 討論
    4.1 低蛋白日糧添加Met對(duì)泌乳小鼠生產(chǎn)性能的影響
    4.2 低蛋白日糧添加Met對(duì)泌乳小鼠血漿激素水平的影響
    4.3 低蛋白日糧添加Met對(duì)乳腺mTOR信號(hào)通路相關(guān)基因、蛋白表達(dá)的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3848040