由于在人類疾病治療與畜牧業(yè)生產(chǎn)中濫用抗生素,導致了細菌耐藥性問題空前嚴峻。一個典型例子是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)在臨床上的分離比例不斷增加,給畜禽養(yǎng)殖業(yè)帶來嚴重問題。但是目前獸醫(yī)臨床中能夠有效治療MRSA感染的藥物卻十分有限,因此防治MRSA已經(jīng)成為當今世界范圍內(nèi)防治畜禽細菌感染的難題和熱點。本研究以MRSA標準株(ATCC33591)和臨床分離株為研究對象,以篩選具有抗菌活性的中藥單體為目標,開展綿馬酚抗MRSA的機制研究;以微量肉湯稀釋法測定出藥物的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC),根據(jù)MIC和MBC的結(jié)果評估綿馬酚的動態(tài)殺菌效果,繪制其殺菌曲線,確定其發(fā)揮最佳藥效的濃度與時間;分別通過小鼠敗血癥致死模型和半致死模型進行保護實驗和治療實驗,綜合評價綿馬酚的體內(nèi)抗菌活性及效果。結(jié)果表明,綿馬酚在體內(nèi)外均具有顯著的抗MRSA活性,且達到了萬古霉素抗菌效果。同時,我們利用轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)對綿馬酚作用前后MRSA菌株的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行比較,并通過熒光定量RT-PCR方法對轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)進...

【文章頁數(shù)】：76 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)給畜牧業(yè)養(yǎng)殖帶來的危害
    1.2 國內(nèi)外治療動物源MRSA的現(xiàn)狀
    1.3 香磷毛蕨素研究概況
        1.3.1 香鱗毛蕨簡介
        1.3.2 香鱗毛蕨化學成分
        1.3.3 綿馬酚研究概況
第2章 綿馬酚抗MRSA體外活性研究
    2.1 實驗材料和實驗儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 綿馬酚對金黃色葡萄球菌敏感菌株和MRSA的抗菌活性
        2.2.2 綿馬酚對ATCC33591的殺菌曲線
        2.2.3 綿馬酚殺胞內(nèi)菌實驗
        2.2.4 綿馬酚作用ATCC33591菌株前后的掃描電子顯微鏡觀察
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 MIC值和MBC值結(jié)果
        2.3.2 殺菌曲線
        2.3.3 綿馬酚殺胞內(nèi)菌活性
        2.3.4 綿馬酚作用ATCC33591前后掃描電鏡圖片
    2.4 小結(jié)與討論
第3章 綿馬酚抗MRSA體內(nèi)活性研究
    3.1 實驗材料和實驗儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 小鼠敗血癥致死模型保護實驗
        3.2.2 小鼠半致死模型橫型治療實驗
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 小鼠致死與亞致死模型MRSA侵染菌量的確定
        3.3.2 小鼠敗血癥模型保護實驗結(jié)果
        3.3.3 小鼠半致死模型治療數(shù)實驗結(jié)果
        3.3.4 病理學檢查
    3.4 小結(jié)與討論
第4章 綿馬酚抗MRSA分子作用機制研究
    4.1 實驗材料和實驗儀器
        4.1.1 實驗菌種
        4.1.2 試劑
        4.1.3 主要儀器設備
    4.2 實驗方法
        4.2.1 樣品處理
        4.2.2 細菌RNA提取
        4.2.3 高通量轉(zhuǎn)錄組測序
        4.2.4 熒光定量PCR
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量剪切及統(tǒng)計
        4.3.2 差異基因表達的聚類分析
        4.3.3 轉(zhuǎn)錄組作用前后ATCC33591轉(zhuǎn)錄組表達差異分析
        4.3.4 差異表達基因的GO富集分析
        4.3.5 差異表達基因的KEGG富集分析
        4.3.6 KEGG代謝通路中相關(guān)基因作用分析
        4.3.7 熒光定量RT-PCR結(jié)果分析
    4.4 小結(jié)與討論
全文結(jié)論
參考文獻
附錄
博士后期間其他工作內(nèi)容
致謝
作者簡介



本文編號：3847419