本文關鍵詞：VEGF、L-蛋氨酸對絨山羊次級毛囊外根鞘細胞增殖和分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本研究旨在研究陜北白絨山羊毛囊外根鞘細胞的體外培養(yǎng),并通過在培養(yǎng)液中分別添加VEGF和L-蛋氨酸,檢測它們對次級毛囊外根鞘細胞的增殖、分化的影響,以及VEGF對次級毛囊外根鞘細胞中FGF5 mRNA表達量的影響,來闡述外根鞘細胞在次級毛囊周期中的作用,為進一步研究絨山羊次級毛囊發(fā)育機制提供理論支持。采集陜北白絨山羊體側部皮膚,通過剪碎、消化、剝離等方法分離初、次級毛囊,再將分離出的毛囊消化得到外根鞘細胞,并置于在37℃、5%CO2飽和濕度條件下培養(yǎng);選用第5代次級毛囊外根鞘細胞,分別添加不同濃度血管內皮生長因子(ascular endothelial growth factor,VEGF)和L-蛋氨酸,分別處理24 h、48 h,噻唑蘭比色法(Methyl thiazolte trazoliu,MTT)檢測VEGF和L-蛋氨酸對細胞活力的影響,EdU核酸標記技術檢測VEGF和L-蛋氨酸對細胞增殖的影響;根據GenBank公布的山羊PCNA、K10和FGF5基因cDNA序列設計引物,通過實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,q-PCR)技術檢測上述三個基因在次級毛囊外根鞘細胞中的表達情況。主要研究結果如下:1.成功培養(yǎng)出了陜北白絨山羊初、次級毛囊外根鞘細胞,并利用細胞免疫熒光的方法檢測到初級外根鞘細胞的標記基因CK17,以及次級毛囊外根鞘細胞的標記基因CK17和CK15,免疫熒光染色結果均呈陽性;對初、次級毛囊外根鞘細胞分別做了生長曲線,均為“S”型,初、次級毛囊外根鞘細胞在形態(tài)和體積上存在一定差異。2.在培養(yǎng)液中添加VEGF可以促進絨山羊次級毛囊外根鞘細胞的增殖,抑制細胞的分化,抑制細胞中FGF5基因的表達。當VEGF處理濃度達到100 ng/mL時,細胞活力(48 h)、增殖細胞數以及PCNA mRNA的表達量均達到最高,且均極顯著高于對照組(P0.01),細胞活力(24 h)顯著高于對照組(P0.05);VEGF處理24 h時的細胞活力和PCNA mRNA表達量的上升趨勢高于48 h。隨著濃度的增加,VEGF對細胞分化的抑制作用在增強,當濃度為100 ng/mL時,K10 mRNA的表達量最低;隨著時間的增加,VEGF對細胞分化的抑制作用在增強,100 ng/mL組處理48 h時的表達量顯著低于處理24 h(P0.05)。隨著濃度的增加,FGF5 mRNA在100 ng/mL組時表達量最低,并推測VEGF可以通過抑制FGF5的表達促進毛囊生長。3.在培養(yǎng)液中添加L-蛋氨酸抑制絨山羊次級毛囊外根鞘細胞的增殖和分化。處理24 h時,隨著濃度的增殖,L-蛋氨酸對細胞增殖的抑制作用在增強,120μg/mL時抑制作用最強,但無顯著差異;處理48 h時,隨著濃度的增加,L-蛋氨酸對細胞增殖的抑制作用先上升后下降,100μg/mL時抑制作用最為顯著,極顯著高于對照組(P0.01),而80μg/mL時PCNA mRNA的表達量最低,無顯著差異;48 h各組的次級毛囊外根鞘細胞的細胞活力均低于24 h。處理24 h時,隨著濃度的增加,K10 mRNA的表達量也呈下降趨勢,120μg/mL組表達量最低,無顯著差異;處理48 h時,K10 mRNA的表達量也先下降后上升,80μg/mL組表達量最低,無顯著差異;過高濃度的L-蛋氨酸(120μg/mL)對次級毛囊外根鞘細胞增殖和分化的抑制效果均有所減弱。綜合以上試驗結果,表明首次成功的培養(yǎng)出了陜北白絨山羊初、次級毛囊外根鞘細胞;VEGF能夠促進次級毛囊外根鞘細胞的增殖,抑制細胞的分化,且抑制次級毛囊外根鞘細胞中FGF5基因的表達;L-蛋氨酸抑制對次級毛囊外根鞘細胞的增殖和分化。
【關鍵詞】：陜北白絨山羊 次級毛囊 外根鞘細胞 VEGF L-蛋氨酸
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S827
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-12
• 第一章 毛囊發(fā)育研究進展12-22
• 1.1 毛囊的基本結構12-14
• 1.2 毛囊的發(fā)育及調控14-16
• 1.3 毛囊的周期及相關分子調控16-18
• 1.4 VEGF在毛囊中作用的研究進展18-19
• 1.5 L-蛋氨酸對毛囊發(fā)育的影響19-20
• 1.6 本研究的目的和意義20-22
• 第二章 絨山羊毛囊外根鞘細胞的體外培養(yǎng)22-29
• 2.1 材料與方法22-24
• 2.1.1 材料22-23
• 2.1.2 試驗方法23-24
• 2.2 結果與分析24-27
• 2.2.1 絨山羊毛囊外根鞘細胞的體外培養(yǎng)24-25
• 2.2.2 初級毛囊和次級毛囊外根鞘細胞的鑒定25-26
• 2.2.3 初級毛囊和次級毛囊外根鞘細胞生長曲線26-27
• 2.3 討論27-28
• 2.4 小結28-29
• 第三章 VEGF對次級毛囊外根鞘細胞增殖和分化的影響29-37
• 3.1 材料與方法29-31
• 3.1.1 材料29
• 3.1.2 試驗方法29-31
• 3.2 結果分析31-34
• 3.2.1 MTT法檢測次級毛囊外根鞘細胞的增殖31
• 3.2.2 EdU檢測次級毛囊外根鞘細胞的增殖31-32
• 3.2.3 PCNA、K10基因在次級毛囊外根鞘細胞中的表達32-33
• 3.2.4 FGF5基因在次級毛囊外根鞘細胞中的表達33-34
• 3.3 討論34-35
• 3.4 小結35-37
• 第四章 L-蛋氨酸對次級毛囊外根鞘細胞增殖和分化的影響37-43
• 4.1 材料與方法37-38
• 4.1.1 材料37
• 4.1.2 試驗方法37-38
• 4.2 結果分析38-41
• 4.2.1 MTT法檢測次級毛囊外根鞘細胞的增殖38-39
• 4.2.2 EdU檢測次級毛囊外根鞘細胞的增殖39-40
• 4.2.3 PCNA、K10基因在次級毛囊外根鞘細胞中的表達40-41
• 4.3 討論41-42
• 4.4 小結42-43
• 第五章 結論43-44
• 5.1 結論43
• 5.2 創(chuàng)新點43
• 5.3 展望43-44
• 參考文獻44-50
• 附錄50-53
• 致謝53-54
• 作者簡介54

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