本試驗(yàn)以LPS誘導(dǎo)的厭食肉雞為模型，分別對其多條作用通路進(jìn)行探索試圖尋找出一個(gè)可以干擾由炎癥反應(yīng)引發(fā)的食欲下降的關(guān)鍵因子。下丘腦作為采食調(diào)控的關(guān)鍵位置，存在大量的食欲基因和蛋白，試驗(yàn)采用腦室注射的方法，阻斷其中一條通路，檢測其厭食效果及炎癥反應(yīng)是否被削弱，從而為改善動物采食情況提供理論依據(jù)。 試驗(yàn)一：選取體重相近的10日齡AA肉雞32只隨機(jī)分為4組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊控制濕度和溫度，肉雞可進(jìn)行自由飲水和采食，單籠單飼。試驗(yàn)前，所有組禁食24h后，分別按照濃度梯度0，0.5，1，2mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS。記錄24h的采食量及96h的體重變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：LPS處理的濃度在0.5mg/kg的時(shí)候就足以引起動物采食下降，且采食量在4小時(shí)開始與對照組差異顯著，隨著LPS濃度的增加并未發(fā)現(xiàn)存在劑量依賴性。為之后試驗(yàn)的處理劑量和采樣時(shí)間提供參考。 試驗(yàn)二：選取體重相近的10日齡的雙A肉雞24只，隨機(jī)分為2組，按照肉雞飼養(yǎng)手冊控制濕度和溫度，肉雞可進(jìn)行自由飲水和采食，單籠單飼。試驗(yàn)前，所有組禁食24h后，分別按照0，0.5mg/kg體重的劑量腹腔注射LPS。注射LPS4h后，將肉雞斷頭，迅速...

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞（Abbreviations）
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 LPS 與厭食的關(guān)系
        1.1.1 LPS 的結(jié)構(gòu)及特性
        1.1.2 LPS 引起炎癥細(xì)胞因子的釋放
        1.1.3 LPS 與采食中樞
        1.1.4 LPS 作用機(jī)制（NF-κB 信號通路）
    1.2 炎癥細(xì)胞因子
    1.3 采食調(diào)控
        1.3.1 下丘腦的采食調(diào)控-中樞黑素皮質(zhì)素系統(tǒng)（CMS）
        1.3.2 外周組織的采食調(diào)控
    1.4 調(diào)控食欲的信號通路
        1.4.1 AMPK 信號通路
        1.4.2 mTOR 信號通路
        1.4.3 FoxO 信號通路
    1.5 選題目的及意義
2 材料和方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 試驗(yàn)動物與日糧
        2.1.2 試驗(yàn)試劑與儀器
    2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)
        2.2.1 肉雞下丘腦 mTOR 通路在 LPS 誘導(dǎo)的厭食中的作用
        2.2.2 激活下丘腦 FoxO1 對 LPS 導(dǎo)致的厭食的調(diào)節(jié)的機(jī)制及研究
    2.3 測定方法
        2.3.1 第三腦室埋管手術(shù)
        2.3.2 第三腦室注射
        2.3.3 下丘腦中總蛋白的提取
        2.3.4 Western Blotting 及成像
        2.3.5 下丘腦中總 RNA 的提取
        2.3.6 RNA 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA
        2.3.7 實(shí)時(shí)熒光相對定量 PCR
        2.3.8 分離擴(kuò)增質(zhì)粒
        2.3.9 質(zhì)粒 DNA 的提取
        2.3.10 293 細(xì)胞的培養(yǎng)
    2.4 數(shù)據(jù)處理
3 結(jié)果分析
    3.1 不同濃度 LPS 對肉雞厭食水平的影響
        3.1.1 不同濃度 LPS 對肉雞采食量的影響
        3.1.2 不同濃度 LPS 對肉雞體增重的影響
    3.2 在 LPS 引起的肉雞厭食中，激活 NF-κB 信號通路對食欲調(diào)節(jié)機(jī)制的影響
        3.2.1 LPS 腹腔注射對 NF-κB 信號通路的影響
        3.2.2 LPS 腹腔注射對 AMPK 信號通路的影響
        3.2.3 LPS 腹腔注射對 mTOR，P70S6K 信號通路的影響
        3.2.4 LPS 腹腔注射對 FoxO1 信號通路的影響
        3.2.5 LPS 腹腔注射對炎癥因子及食欲因子的影響
    3.3 通過中樞注射 Rapamycin 阻斷下丘腦 mTOR 信號通路對 LPS 導(dǎo)致的厭食的調(diào)節(jié)
        3.3.1 阻斷 mTOR 通路對 LPS 誘導(dǎo)的采食量下降的影響
        3.3.2 阻斷 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 對 NF-κB 信號通路的影響
        3.3.3 阻斷 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 對 mTOR，P70S6K 信號通路的影響
        3.3.4 阻斷 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 對 FoxO1 信號通路的影響
        3.3.5 阻斷 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 對炎癥因子及食欲因子的影響
    3.4 激活下丘腦 FoxO1 對 LPS 導(dǎo)致的厭食的調(diào)節(jié)的機(jī)制及研究
        3.4.1 過表達(dá) FoxO1 質(zhì)粒的選擇
        3.4.2 腦室注射過表達(dá) FoxO1 腺病毒對采食量的影響
4 討論
    4.1 腹腔注射 LPS 對肉雞采食量的影響及炎癥因子和食欲基因 mRNA 的表達(dá)
    4.2 腹腔注射 LPS 對于相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        4.2.1 腹腔注射 LPS 對下丘腦 AMPK 的影響
        4.2.2 腹腔注射 LPS 對下丘腦 NF-κB 的影響
        4.2.3 腹腔注射 LPS 對下丘腦 FoxO1 的影響
        4.2.4 腹腔注射 LPS 對下丘腦 mTOR 的影響
    4.3 阻斷 mTOR 通路對 LPS 誘導(dǎo)的厭食肉雞的采食量的影響及炎癥因子和食欲基因mRNA 的表達(dá)
    4.4 阻斷 mTOR 通路對 LPS 誘導(dǎo)的厭食肉雞相關(guān)蛋白的磷酸化水平的影響
        4.4.1 阻斷 mTOR 通路對 LPS 誘導(dǎo)的厭食肉雞 NF-κB 的磷酸化水平的影響
        4.4.2 阻斷 mTOR 通路對 LPS 誘導(dǎo)的厭食肉雞 mTOR 的磷酸化水平的影響
        4.4.3 阻斷 mTOR 通路對 LPS 誘導(dǎo)的厭食肉雞 FoxO1 的磷酸化水平的影響
    4.5 腦室注射過表達(dá) FoxO1 腺病毒對采食量的影響
5 結(jié)論與研究前景
    5.1 結(jié)論
    5.2 課題創(chuàng)新
    5.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3830975