hTNF-α是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的直接殺傷腫瘤作用最強(qiáng)的生物活性因子之一,由于毒副作用較大、半衰期短、低劑量抗腫瘤效果不顯著等原因限制了臨床上的廣泛應(yīng)用,但改造后的hTNF-α衍生物具有高效低毒的特點(diǎn);hIFN-γ屬于Ⅱ型干擾素,具有廣譜的抗病毒作用,在醫(yī)學(xué)臨床上常用于病毒性疾病、腫瘤和自身免疫性疾病的治療。禽類原始生殖細(xì)胞(PGCs)是配子的前體細(xì)胞,可以作為將外源基因轉(zhuǎn)入基因組和生殖系的有效載體,因?yàn)镻GCs能夠通過血流靶向進(jìn)入雜合子胚胎性索,將遺傳特性直接傳遞給后代。如果將生殖細(xì)胞的標(biāo)志基因DAZL和CVH與目的基因體內(nèi)或體外共同導(dǎo)入PGCs,可能會提高這類細(xì)胞的生殖系傳遞能力,從而有助于解決轉(zhuǎn)基因雞效率低下的難題。方法:(1)從健康志愿者外周靜脈血分離出淋巴細(xì)胞培養(yǎng),培養(yǎng)液中添加脂多糖(LPS)激活巨噬細(xì)胞,用TRIzol法提取總RNA,運(yùn)用RT-PCR技術(shù)克隆hTNF-α、hIFN-γ基因,并對hTNF-α基因進(jìn)行突變改造;采用PCR技術(shù)從 pMD18-T-CVH、pMD18-T-DAZL 克隆雞 CVH 和 DAZL 基因。(2)應(yīng)用MultiSite Gateway技術(shù)構(gòu)建卵...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
文獻(xiàn)綜述
    第一章 hTNF-α、hIFN-γ、CVH和雞DAZL基因研究進(jìn)展
        1.1 腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的研究進(jìn)展
            1.1.1 腫瘤壞死因子-α的概述
            1.1.2 腫瘤壞死因子-α的生化特性
            1.1.3 腫瘤壞死因子-α基因組結(jié)構(gòu)及表達(dá)
        1.2 人γ干擾素(hIFN-γ)的研究進(jìn)展
            1.2.1 人γ干擾素(hIFN-γ)的概述
            1.2.2 hIFN-γ的分子生物學(xué)特性
            1.2.3 hIFN-γ的生物學(xué)作用
        1.3 CVH基因研究進(jìn)展
            1.3.1 Vasa基因概述
            1.3.2 Vasa基因功能及作用機(jī)理
            1.3.3 Vasa基因的應(yīng)用
            1.3.4 CVH基因表達(dá)
        1.4 DAZL基因研究進(jìn)展
            1.4.1 DAZL基因概述
            1.4.2 DAZL基因的時空表達(dá)
            1.4.3 雞DAZL基因的保守表達(dá)
            1.4.4 DAZL基因與分子標(biāo)記
            1.4.5 DAZL與生殖細(xì)胞調(diào)控
        1.5 研究的目的與意義
實(shí)驗(yàn)研究
    第二章 hTNF-α、hIFN-γ、CVH、雞 DAZL 基因克隆
        2.1 前言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 儀器設(shè)備
            2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.2.3 常用溶液配制
            2.2.4 hTNF-α、hIFN-γ基因克隆
            2.2.5 CVH和雞DAZL基因的克隆
        2.3 結(jié)果與分析
            2.3.1 hTNF-α、hIFN-γ基因的RT-PCR
            2.3.2 pMD18-T-hTNF-α重組質(zhì)粒的構(gòu)建
            2.3.3 TNF-α基因測序結(jié)果
            2.3.4 hTNF-α點(diǎn)突變PCR擴(kuò)增
            2.3.5 CVH和雞DAZL基因PCR擴(kuò)增
            2.3.6 入門載體構(gòu)建
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建及體外表達(dá)
        3.1 前言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 儀器設(shè)備
            3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            3.2.3 常用溶液配制
            3.2.4 慢病毒表達(dá)載體構(gòu)建
            3.2.5 慢病毒表達(dá)載體去內(nèi)毒素質(zhì)粒中提
            3.2.6 慢病毒包裝及表達(dá)檢測
        3.3 結(jié)果與分析
            3.3.1 慢病毒載體酶切鑒定與測序結(jié)果
            3.3.2 去內(nèi)毒素慢病毒載體質(zhì)粒濃度及純度測定
            3.3.2 慢病毒載體表達(dá)檢測
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
攻讀碩士期間發(fā)表論文情況



本文編號：3830620