發(fā)布時間：2023-05-19 03:13

　　乳腺是奶山羊的泌乳器官,在分子水平研究乳腺的調(diào)控機(jī)理是國內(nèi)外的研究熱點(diǎn)。已有研究表明,miRNA對乳腺的發(fā)育和泌乳性能的調(diào)控具有重要作用。本實(shí)驗(yàn)室在前期通過基因測序發(fā)現(xiàn),miR-3880在奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳中差異表達(dá),但目前尚未有關(guān)miR-3880調(diào)控奶山羊乳腺發(fā)育和泌乳的試驗(yàn)研究。本研究以奶山羊乳腺上皮細(xì)胞為研究對象,利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測、RT-qPCR、Western blot分析和雙熒光素酶報告載體構(gòu)建等方法,研究miR-3880在奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中對靶基因OGR1的調(diào)控作用;采用siRNA干擾技術(shù)研究靶基因OGR1對奶山羊乳腺上皮細(xì)胞的調(diào)控作用,以期闡明mi R-3880及其靶基因OGR1對奶山羊乳腺上皮細(xì)胞生長及泌乳的調(diào)控作用機(jī)制,為奶山羊泌乳調(diào)控提供試驗(yàn)依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.奶山羊乳腺上皮細(xì)胞中miR-3880對OGR1基因的調(diào)節(jié)作用利用靶基因預(yù)測軟件發(fā)現(xiàn),OGR1的3′UTR區(qū)含有miR-3880的靶向結(jié)合位點(diǎn)。構(gòu)建OGR1-3′UTR的雙熒光素酶報告載體,分別將miRNA的模擬物(mimics)與報告載體共轉(zhuǎn)到293T細(xì)胞中,檢測熒光素酶的活性。結(jié)果表明,m...

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 奶山羊乳腺調(diào)控機(jī)理的研究意義
    1.2 奶山羊乳腺發(fā)育的研究進(jìn)展
        1.2.1 乳腺的發(fā)育及泌乳機(jī)理
        1.2.2 乳腺上皮細(xì)胞的簡介
    1.3 miRNA與乳腺發(fā)育
        1.3.1 miRNA的作用機(jī)制
        1.3.2 miRNA靶基因的鑒定方法
        1.3.3 miRNA對乳腺發(fā)育的調(diào)控
        1.3.4 miRNA對泌乳功能的調(diào)控作用
    1.4 RNA干擾技術(shù)的研究進(jìn)展
    1.5 OGR1基因的研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的和意義
    1.7 研究思路及技術(shù)路線
試驗(yàn)研究
    第二章 miR-3880對OGR1基因調(diào)控作用的研究
        2.1 引言
        2.2 材料與方法
            2.2.1 樣品采集
            2.2.2 主要儀器設(shè)備
            2.2.3 主要試驗(yàn)試劑
            2.2.4 miR-3880靶基因的預(yù)測
            2.2.5 雙熒光素酶報告載體和突變載體的構(gòu)建
            2.2.6 化學(xué)合成miRNA模擬物
            2.2.7 293 T細(xì)胞共轉(zhuǎn)染及熒光素酶活性檢測
            2.2.8 奶山羊乳腺上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)染
            2.2.9 Realtime-qPCR
            2.2.10 WesternBlot檢測
            2.2.11 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        2.3 結(jié)果分析
            2.3.1 miR-3880靶基因的生物信息預(yù)測
            2.3.2 OGR1-3′UTR區(qū)的克隆
            2.3.3 雙熒光素酶報告載體構(gòu)建
            2.3.4 突變雙熒光素酶報告載體的構(gòu)建
            2.3.5 熒光素酶活性的檢測分析
            2.3.6 miR-3880對OGR1基因在mRNA水平的影響
            2.3.7 miR-3880對OGR1基因在蛋白水平的影響
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第三章 OGR1對奶山羊乳腺上皮細(xì)胞調(diào)控作用的研究
        3.1 引言
        3.2 材料與方法
            3.2.1 樣品的采集
            3.2.2 主要儀器設(shè)備
            3.2.3 主要試驗(yàn)試劑
            3.2.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
            3.2.5 CCK8法檢測細(xì)胞增殖
            3.2.6 ELISA試劑盒檢測細(xì)胞中β-酪蛋白的合成
            3.2.7 甘油三酯酶法檢測試劑盒檢測細(xì)胞中甘油三酯的合成
            3.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
        3.3 結(jié)果分析
            3.3.1 OGR1干擾效率檢測
            3.3.2 OGR1干擾后對乳腺上皮細(xì)胞生長發(fā)育的影響
            3.3.3 OGR1干擾后對乳腺上皮細(xì)胞泌乳功能的影響
        3.4 討論
            3.4.1 OGR1對奶山羊乳腺上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響
            3.4.2 OGR1對奶山羊乳腺上皮細(xì)胞泌乳成分的調(diào)節(jié)
        3.5 小結(jié)
研究結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
進(jìn)一步研究的問題
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3819541