奶牛胎衣不下（Retained fetal membranes,RFM）是一種常見危害奶牛健康的繁殖障礙性疾病，引起該病的病因復(fù)雜，影響因素較多，但其發(fā)生的關(guān)鍵機(jī)制，特別是疾病發(fā)生的分子基礎(chǔ)至今尚不明確，直接影響該病的防治效果。比較蛋白質(zhì)組學(xué)和生物信息學(xué)技術(shù)為全面系統(tǒng)的研究奶牛胎衣不下發(fā)生過程中靶器官胎盤組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)，發(fā)現(xiàn)致病的主要分子提供了方法學(xué)保障。本項(xiàng)目用以上技術(shù)對健康及胎衣不下奶牛胎盤組織差異表達(dá)蛋白質(zhì)進(jìn)行篩選、鑒定與驗(yàn)證，尋找引起該病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵蛋白質(zhì)，揭示其致病作用和途徑，為闡明奶牛胎衣不下發(fā)病分子機(jī)制和篩選早期臨床診斷標(biāo)志物提供理論依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)收集胎衣不下奶牛及胎衣正常脫落奶牛胎盤組織各3份，應(yīng)用雙向凝膠電泳技術(shù)對胎盤組織中蛋白進(jìn)行分離，銀染顯色獲得差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，并用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)對其進(jìn)行鑒定。同時(shí)對所得到的的差異表達(dá)蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析及熒光定量驗(yàn)證。 本實(shí)驗(yàn)獲得胎衣不下奶牛胎盤組織的雙向電泳圖譜，在胎兒胎盤中篩選出240個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)，其中表達(dá)上調(diào)蛋白點(diǎn)數(shù)為212個(gè)，表達(dá)下調(diào)蛋白點(diǎn)數(shù)為28個(gè)；母體胎盤中差異表達(dá)蛋白點(diǎn)數(shù)共有214個(gè)...

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號說明
目錄
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 引言
    1.2 奶牛胎衣不下的的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 奶牛胎衣不下的臨床癥狀
        1.2.2 奶牛胎衣不下的發(fā)病機(jī)理
        1.2.3 奶牛胎衣不下的治療
        1.2.4 存在的問題
    1.3 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 蛋白質(zhì)組學(xué)的研究技術(shù)平臺
        1.3.2 雙向凝膠電泳與 MALDI-TOF-MS 技術(shù)
    1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用
        1.4.1 蛋白質(zhì)組學(xué)在人類疾病中的應(yīng)用
        1.4.2 蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物方面的應(yīng)用
        1.4.3 蛋白質(zhì)組學(xué)在藥物開發(fā)方面的應(yīng)用
        1.4.4 蛋白質(zhì)組學(xué)在胎盤方面的應(yīng)用
第二章 胎衣不下奶牛胎盤組織差異表達(dá)蛋白的篩選
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.2 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組和處理
        2.2.2 樣品制備
        2.2.3 差異表達(dá)蛋白的篩選
        2.2.4 部分差異表達(dá)蛋白的鑒定
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 樣品蛋白含量的測定
        2.3.2 胎衣不下奶牛胎盤組織差異表達(dá)蛋白的分離
        2.2.3 部分差異表達(dá)蛋白位點(diǎn)的 SELDI-TOF-MS 鑒定
    2.4 討論
第三章 部分差異表達(dá)蛋白的生物信息學(xué)分析
    3.1 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        3.1.1 部分差異表達(dá)蛋白的 GO 分析
        3.1.2 部分差異表達(dá)蛋白的 KEGG 數(shù)據(jù)庫分析
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 部分差異表達(dá)蛋白的 GO 分析結(jié)果
        3.2.2 差異表達(dá)蛋白的 KEGG 分析結(jié)果
    3.3 分析與討論
        3.3.1 血凝反應(yīng)與奶牛胎衣不下的關(guān)系
        3.3.2 炎癥反應(yīng)與奶牛胎衣不下的關(guān)系
        3.3.3 機(jī)體氧化應(yīng)激作用與奶牛胎衣不下的關(guān)系
        3.3.4 營機(jī)體養(yǎng)代謝與胎衣不下的關(guān)系
第四章 差異表達(dá)蛋白的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 驗(yàn)證
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 試驗(yàn)材料
        4.1.2 主要儀器
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 奶牛胎盤組織中總 RNA 的提取
        4.2.2 胎盤組織 cDNA 的合成
        4.2.3 胎盤差異表達(dá)蛋白的實(shí)時(shí)熒光定量 PCR
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 總 RNA 提取與質(zhì)量檢測
        4.3.2 部分差異表達(dá)蛋白點(diǎn) mRNA 的相對表達(dá)
    4.4 討論
第五章 結(jié)論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3818774