天然免疫是宿主抵御病原體侵染的第一道防線。當(dāng)病原體侵染宿主細(xì)胞時,首先由宿主細(xì)胞的模式識別受體(pathogen-recognition receptors,PRRs)識別病原體的病原相關(guān)模式分子(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs),從而引發(fā)一系列免疫應(yīng)答反應(yīng),最終清除病原體。RIG-Ⅰ樣受體(retinoic acid-induced geneⅠ-like receptors,RLRs)是細(xì)胞的主要模式識別受體之一。當(dāng)宿主細(xì)胞的RLRs識別PAMPs后,可激活細(xì)胞中RLRs介導(dǎo)的信號通路,誘導(dǎo)干擾素(IFN)及其他基因的表達(dá),促發(fā)一系列抗病毒反應(yīng)。細(xì)胞自噬(Autophagy),是細(xì)胞在自噬相關(guān)基因(autophagy-related gene,ATG)編碼蛋白的調(diào)控下,利用溶酶體降解并清除自身受損細(xì)胞的細(xì)胞器和大分子物質(zhì),維持細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的過程,是細(xì)胞的一種自我保護(hù)機(jī)制。已報道有眾多自噬相關(guān)蛋白參與細(xì)胞自噬,其中,ATG13蛋白在細(xì)胞自噬的起始階段起關(guān)鍵作用。目前對ATG13蛋白在天然免疫RLRs信號通路中的作用未見報道。本論文...

【文章頁數(shù)】：72 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1 國內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.1 天然免疫是宿主抵御病原微生物的第一道防線
        1.2 RIG-Ⅰ樣信號通路
            1.2.1 RIG-Ⅰ樣受體結(jié)構(gòu)
            1.2.2 RIG-Ⅰ樣受體識別PAMPs機(jī)制
            1.2.3 RIG-Ⅰ樣受體介導(dǎo)抗病毒信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
            1.2.4 腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子(TRAF)家族在RLRs中的作用
        1.3 JAK-STAT信號通路的激活
        1.4 自噬相關(guān)蛋白
        1.5 ATG13 蛋白結(jié)構(gòu)
        1.6 ATG蛋白調(diào)控抗病毒天然免疫信號通路
            1.6.1 ATG蛋白調(diào)控RLRs信號通路
            1.6.2 調(diào)節(jié)STING介導(dǎo)的天然免疫應(yīng)答
            1.6.3 ATG蛋白參與炎癥反應(yīng)
        1.7 ATG蛋白參與抗動物病原侵染
            1.7.1 抑制病毒復(fù)制
            1.7.2 破壞動物寄生蟲納蟲泡
            1.7.3 清除流產(chǎn)布魯氏菌感染
            1.7.4 宿主-病原互作
    2 研究的目的和意義
第2章 ATG13 蛋白激活細(xì)胞RLRs信號通路
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 試劑及材料
            1.1.2 細(xì)胞、質(zhì)粒
            1.1.3 設(shè)備
            1.1.4 溶液配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 pCMV-HA-ATG13質(zhì)粒構(gòu)建
            1.2.2 HEK293T細(xì)胞培養(yǎng)
            1.2.3 質(zhì)粒提取
            1.2.4 篩選可激活I(lǐng)SRE的 ATG蛋白
            1.2.5 ATG13 蛋白激活I(lǐng)FN-β產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)
            1.2.6 RNA提取
            1.2.7 反轉(zhuǎn)錄
            1.2.8 實(shí)時熒光定量PCR檢測IFN-β及下游ISGs基因表達(dá)
            1.2.9 免疫共沉淀分析ATG13 蛋白與RLRs信號通路中的互作蛋白
            1.2.10 Western blot檢測ATG13 蛋白、RIG-IN蛋白表達(dá)以及siRNA干擾效果
            1.2.11 統(tǒng)計學(xué)分析
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 ATG13 蛋白激活I(lǐng)SRE報告基因活性
        2.2 ATG13 蛋白激活I(lǐng)SRE-luc呈劑量依賴型
        2.3 ATG13 蛋白激活細(xì)胞RLRs信號通路
        2.4 最佳ATG13 siRNA的篩選
        2.5 敲低ATG13對IFN-β及下游ISGs產(chǎn)生的影響
        2.6 免疫共沉淀分析ATG13 蛋白可以與RLRs信號通路中接頭蛋白MAVS、TRAF3以及TRAF6 發(fā)生相互作用
    3 分析與討論
    4 小結(jié)
第3章 ATG13 蛋白調(diào)控EMCV和 VSV復(fù)制
    1 材料與方法
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 試劑及材料
            1.1.2 病毒、細(xì)胞、質(zhì)粒
            1.1.3 設(shè)備
            1.1.4 溶液配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 細(xì)胞及病毒培養(yǎng)
            1.2.2 TCID50 測定
            1.2.3 病毒在HEK293T細(xì)胞中增值驗(yàn)證
            1.2.4 病毒感染及外源干擾素對ATG13 基因轉(zhuǎn)錄的影響
            1.2.5 ATG13 蛋白抑制病毒復(fù)制實(shí)驗(yàn)
            1.2.6 表觀抗病毒因子產(chǎn)生檢測實(shí)驗(yàn)
            1.2.7 外源干擾素抑制EMCV和 VSV復(fù)制
            1.2.8 JAK I Inhibitor抑制JAK-STAT信號通路
            1.2.9 RNA提取、反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)、實(shí)時熒光定量PCR檢測
            1.2.10 Western blot檢測ATG13 蛋白
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.1 EMCV和 VSV均可在HEK293T細(xì)胞中復(fù)制
        2.2 病毒感染后誘導(dǎo)ATG13 基因轉(zhuǎn)錄
        2.3 外源干擾素誘導(dǎo)ATG13 基因轉(zhuǎn)錄
        2.4 過表達(dá)ATG13 蛋白抑制病毒復(fù)制
        2.5 敲低ATG13 對病毒復(fù)制的影響
        2.6 ATG13 蛋白激活的細(xì)胞因子對病毒復(fù)制的影響
        2.7 外源干擾素對病毒復(fù)制影響
        2.8 JAK-STAT信號通路對病毒復(fù)制影響
    3 分析與討論
    4 小論
第4章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
    作者簡介
    碩士期間參與的課題研究
    碩士期間發(fā)表的論文
致謝



本文編號：3810529