FHL2(Four and a half LIM domains protein 2)基因是FHL基因家族中研究最多的一位成員,FHL2不僅可以結(jié)合不同轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控相關(guān)基因表達(dá),而且對(duì)于細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路也有重要調(diào)控作用。研究表明FHL2在人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞中表達(dá),轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-α(Transforming growth factor-α,TGF-α)可通過(guò)PI3K/AKT和MAPK信號(hào)通路調(diào)控人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞KGN增殖。但FHL2對(duì)KGN細(xì)胞的調(diào)控作用、TGF-α與FHL2互作、以及該互作對(duì)顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用尚不清楚。本課題以KGN為模型,對(duì)上述問(wèn)題予以探究。本研究結(jié)果將為深入了解卵泡發(fā)育和卵泡發(fā)育的調(diào)控機(jī)制提供新的理論基礎(chǔ),同時(shí)為卵泡發(fā)育相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路提供新的研究思路。主要研究結(jié)果如下:1.FHL2調(diào)控KGN細(xì)胞的增殖、周期及TGF-α的表達(dá)干擾KGN細(xì)胞中FHL2的表達(dá)后,分別利用CCK-8試劑盒、流式細(xì)胞術(shù)以及RT-PCR檢測(cè)FHL2對(duì)細(xì)胞增殖、周期的影響以及對(duì)TGF-α的表達(dá)調(diào)控:1)CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖結(jié)果顯示,FHL2干擾組細(xì)胞存活率(1.00±0.01 vs0...

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
1 前言
    1.1 研究問(wèn)題的由來(lái)
    1.2 FHL2基因研究進(jìn)展
        1.2.1 FHL2基本結(jié)構(gòu)
        1.2.2 FHL2基因的表達(dá)和定位
        1.2.3 FHL2基因的主要功能
        1.2.4 FHL2基因在腫瘤細(xì)胞中的研究進(jìn)展
        1.2.5 FHL2基因調(diào)節(jié)卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)育的研究進(jìn)展
    1.3 TGF-α 研究進(jìn)展
        1.3.1 TGF-α 的基本結(jié)構(gòu)
        1.3.2 TGF-α 的表達(dá)和基本功能
        1.3.3 TGF-α 參與調(diào)控卵巢顆粒細(xì)胞發(fā)育
    1.4 實(shí)驗(yàn)的目的和意義
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑與耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.4 實(shí)驗(yàn)試劑的配制
3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞系KGN的培養(yǎng)、傳代及凍存
        3.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.1.2 細(xì)胞傳代
        3.1.3 細(xì)胞凍存
        3.1.4 細(xì)胞復(fù)蘇
    3.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
    3.3 細(xì)胞加藥處理
        3.3.1 TGF-α 處理細(xì)胞
        3.3.2 通路抑制劑處理細(xì)胞
    3.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)
    3.5 細(xì)胞周期檢測(cè)
    3.6 CCK-8 法檢測(cè)細(xì)胞增殖
    3.7 人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞系KGN總RNA的提取
        3.7.1 RNA的抽提
        3.7.2 RNA濃度及質(zhì)量檢測(cè)
    3.8 cDNA鏈反轉(zhuǎn)錄合成
        3.8.1 cDNA第一鏈合成
        3.8.2 cDNA的濃度檢測(cè)
    3.9 引物設(shè)計(jì)
    3.10 QRT-PCR
    3.11人卵巢顆粒細(xì)胞瘤細(xì)胞系KGN總蛋白提取和Western Blot實(shí)驗(yàn)
        3.11.1 蛋白的提取
        3.11.2 蛋白濃度檢測(cè)及制樣
        3.11.3 蛋白免疫印跡
    3.12 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
        3.12.1 FHL2影響卵巢顆粒細(xì)胞的生長(zhǎng)
        3.12.2 TGF-α 對(duì)KGN細(xì)胞增殖的影響及調(diào)控FHL2的表達(dá)
        3.12.3 TGF-α 調(diào)控FHL2作用的相關(guān)信號(hào)通路探究
    3.13 數(shù)據(jù)分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 FHL2對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞的調(diào)控作用
        4.1.1 si-FHL2干擾效果檢測(cè)
        4.1.2 FHL2對(duì)KGN細(xì)胞增殖的影響
        4.1.3 FHL2對(duì)KGN細(xì)胞周期的影響
        4.1.4 FHL2對(duì)TGF-α、EGFR基因表達(dá)的影響
    4.2 TGF-α 對(duì)KGN細(xì)胞增殖的影響及調(diào)控FHL2的表達(dá)
        4.2.1 TGF-α 促進(jìn)KGN細(xì)胞增殖
        4.2.2 TGF-α 促進(jìn)FHL2的表達(dá)
        4.2.3 TGF-α 調(diào)控FHL2、EGFR、TGF-α 基因的表達(dá)
    4.3 TGF-α 調(diào)控FHL2基因表達(dá)的相關(guān)信號(hào)通路研究
5 討論
    5.1 KGN細(xì)胞是研究卵巢顆粒細(xì)胞功能的良好模型
    5.2 FHL2對(duì)KGN細(xì)胞的增殖和周期具有重要調(diào)控作用
    5.3 TGF-α 對(duì)KGN細(xì)胞的調(diào)控作用依賴于FHL2的表達(dá)量
    5.4 TGF-α 與FHL2互作共同調(diào)控顆粒細(xì)胞的增殖
    5.5 TGF-α 調(diào)控FHL2相關(guān)信號(hào)通路探究
6 總結(jié)
    6.1 本試驗(yàn)主要結(jié)果
    6.2 本試驗(yàn)創(chuàng)新點(diǎn)
    6.3 本試驗(yàn)不足點(diǎn)及下一步計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3804004