巨型艾美耳球蟲(Eimeria maxima)是集約化養(yǎng)雞場(chǎng)最常見的3種球蟲之一，主要感染3月齡以內(nèi)的雛雞，分布較廣，致病力中等。小劑量感染時(shí)不會(huì)引起嚴(yán)重死亡，但造成飼料轉(zhuǎn)化率低，降低雛雞體增重，引起巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鑒于該球蟲對(duì)養(yǎng)雞業(yè)的重要危害，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了大量研究。本試驗(yàn)通過分離獲得該球蟲純種卵囊建立純種傳代系，對(duì)其進(jìn)行一般生物學(xué)特性、致病性、免疫原性以及分子生物學(xué)等方面的研究，為巨型艾美耳球蟲的深入研究奠定基礎(chǔ)。 本研究采用單卵囊分離技術(shù)，從保定市某雞場(chǎng)球蟲混合感染的雛雞糞便中，分離出疑似巨型艾美耳球蟲。分離的球蟲進(jìn)行形態(tài)學(xué)和生活史觀察，其寄生于小腸中段、卵囊為卵圓形、卵較大、卵囊壁金黃色。測(cè)100個(gè)卵囊的大小為(32.0-40.8)×(20.8-31.2)um，平均大小為36.4um×26.0um，卵囊形態(tài)指數(shù)為1.4。卵囊窄端有一折光性強(qiáng)的極體，無內(nèi)外殘?bào)w。最短孢子化時(shí)間為26h，完全孢子化時(shí)間為28h，潛隱期128h。鑒定為巨型艾美耳球蟲，命名為巨型艾美耳球蟲保定株。 分別用1×104、2×104、5×104、10×104個(gè)/只孢子化卵囊的劑量感染四組海蘭灰公雛，對(duì)其...

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 分類及生活史
        1.1.1 球蟲分類
        1.1.2 生活史
    1.2 艾美耳球蟲單卵囊分離
    1.3 艾美耳球蟲蟲株鑒定
        1.3.1 形態(tài)學(xué)鑒定
        1.3.2 PCR 技術(shù)
        1.3.3 同工酶技術(shù)
    1.4 艾美耳球蟲的致病性
    1.5 巨型艾美耳球蟲的免疫學(xué)特征
        1.5.1 球蟲免疫原性
        1.5.2 球蟲發(fā)育過程中的免疫原性
        1.5.3 淋巴細(xì)胞及抗體在雞球蟲病保護(hù)免疫中的作用
    1.6 本研究的目的意義
2 材料與方法
    2.1 巨型艾美耳球蟲單卵囊的分離及鑒定
        2.1.1 主要試劑及溶液的配制
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.4 球蟲混合卵囊的收集
        2.1.5 球蟲單卵囊的分離
        2.1.6 單卵囊分離感染成功率
        2.1.7 單卵囊二代增殖
        2.1.8 球蟲卵囊形態(tài)學(xué)鑒定
        2.1.9 潛隱期的測(cè)定
        2.1.10 最短孢子化時(shí)間的測(cè)定
        2.1.11 寄生部位的檢查
        2.1.12 球蟲卵囊的純化
        2.1.13 球蟲卵囊 DNA 制備
        2.1.14 引物設(shè)計(jì)與合成
        2.1.15 PCR 產(chǎn)物的的純化與回收
        2.1.16 擴(kuò)增片段的測(cè)序及同源性分析
    2.2 巨型艾美耳球蟲的致病性研究
        2.2.1 巨型艾美耳球蟲蟲株
        2.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.3 接種卵囊計(jì)數(shù)及雛雞分組
        2.2.4 糞便情況
        2.2.5 小腸病變記分
        2.2.6 卵囊排出情況
        2.2.7 體增重
    2.3 巨型艾美耳球蟲的免疫原性研究
        2.3.1 巨型艾美耳球蟲蟲株
        2.3.2 試驗(yàn)動(dòng)物
        2.3.3 主要溶液的配制
        2.3.4 主要試劑及儀器設(shè)備
        2.3.5 雛雞免疫分組
        2.3.6 血清中 IgG 含量測(cè)定
        2.3.7 T 淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)
        2.3.8 數(shù)據(jù)處理
        2.3.9 體增重
        2.3.10 腸道病變值的判定
        2.3.11 OPG 值（克糞便卵囊數(shù)）
3 結(jié)果
    3.1 球蟲卵囊形態(tài)學(xué)及分子生物學(xué)鑒定結(jié)果
        3.1.1 單卵囊分離結(jié)果
        3.1.2 分離蟲株的生物學(xué)特性
        3.1.3 卵囊純化結(jié)果
        3.1.4 PCR 擴(kuò)增結(jié)果
        3.1.5 膠回收結(jié)果
        3.1.6 序列測(cè)定及同源性分析結(jié)果
        3.1.7 系統(tǒng)發(fā)生分析
    3.2 巨型艾美耳球蟲致病性研究
        3.2.1 人工感染球蟲卵囊臨床癥狀
        3.2.2 剖檢小腸病變記分和血便記分
        3.2.3 增重及死亡情況
        3.2.4 卵囊排出情況
    3.3 巨型艾美耳球蟲免疫原性研究
        3.3.1 血清 IgG 抗體含量檢測(cè)結(jié)果
        3.3.2 外周血 T 淋巴細(xì)胞增殖結(jié)果
        3.3.3 增重情況
        3.3.4 腸道病變記分
        3.3.5 卵囊計(jì)數(shù)（OPG 值）
4 討論
    4.1 單卵囊分離技術(shù)及蟲種鑒定
    4.2 雞球蟲的致病性
    4.3 雞球蟲的免疫原性
5 結(jié)論
6 參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
作者簡(jiǎn)歷
致謝



本文編號(hào)：3797187