達氟沙星(Danofloxacin,DAN)是20世紀80年代開發(fā)的一種氟喹諾酮藥物,屬于第三代喹諾酮類抗菌藥。其抗菌譜廣,可以有效抑制革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、衣原體、支原體、螺旋體及某些厭氧菌。DAN的作用機制是通過抑制細菌DNA螺旋酶和拓撲異構酶Ⅳ的活性,阻礙細菌DNA的合成而致其死亡。DAN因其抑菌的廣譜性和有效性,常作為飼料添加劑、疫病預防與治療藥物得到廣泛應用。然而,DAN的濫用會帶來一系列的副作用,如導致細菌耐藥性增加和藥物殘留等,嚴重威脅人類健康和動物源食品安全。目前各國政府都對其制定了限量標準,以保證動物性食品安全和人類健康。本研究自主設計方案合成了 DAN的免疫原以免疫小鼠,并將陽性小鼠的脾臟細胞與骨髓瘤細胞SP2/0融合。融合后的雜交瘤細胞經“篩選-克隆-篩選-克隆-篩選-克隆-篩選”過程,共獲得了 6株細胞株。將該細胞株擴充培養(yǎng)后進行保種并制備腹水,腹水經純化后共獲得6種高質量的抗DAN的單克隆抗體。這6種抗DAN單克隆抗體分別為3A10-A1-C6-H1、3A10-A1-C6-G9、3A10-A1-C6-H9、3A10-A1-F1-D12、3A10-B4-D...

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【學位級別】：碩士

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摘要
ABSTRACT
縮略語索引
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 達氟沙星的理化性質
    1.3 達氟沙星的作用機制
    1.4 達氟沙星的限量標準
    1.5 達氟沙星的應用現(xiàn)狀
    1.6 達氟沙星檢測技術的研究進展
        1.6.1 高效液相色譜法
        1.6.2 液相-質譜聯(lián)用法
        1.6.3 毛細管電泳法
        1.6.4 熒光分光光度法
        1.6.5 旋光法
        1.6.6 免疫層析檢測技術
        1.6.7 酶聯(lián)免疫吸附法
    1.7 研究內容及意義
第2章 抗達氟沙星單克隆抗體的制備及評價
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 實驗儀器設備
        2.2.2 實驗材料試劑
        2.2.3 實驗試劑的配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 達氟沙星免疫原與包被原的制備
        2.3.2 小鼠免疫及血清評價方案
        2.3.3 細胞融合
        2.3.4 腹水制備
        2.3.5 單克隆抗體純化
        2.3.6 抗體評價
    2.4 結果與分析
        2.4.1 免疫原表征
        2.4.2 小鼠免疫應答
        2.4.3 陽性雜交瘤細胞株的篩選
        2.4.4 抗體濃度測定
        2.4.5 抗體評價工作點的優(yōu)化
        2.4.6 抗體標準曲線的建立
        2.4.7 抗體特異性的評價
    2.5 小結及展望
第3章 基于三角銀納米片的PELISA靈敏檢測氟喹諾酮類藥物*
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 實驗材料試劑
        3.2.2 實驗儀器設備
        3.2.3 實驗試劑的配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 三角銀納米片(AgNPRs)的合成
        3.3.2 生物素化單克隆抗體的制備
        3.3.3 生物素化葡萄糖氧化酶的制備
        3.3.4 基于AgNPRs的pELISA
        3.3.5 基于TMB的ELISA
        3.3.6 pELISA的特異性分析
        3.3.7 回收率分析
    3.4 結果與分析
        3.4.1 檢測原理
        3.4.2 GOx催化刻蝕AgNPRs的表征
        3.4.3 Biotin-mAb、Biotin-GOx的表征
        3.4.4 關鍵參數(shù)的優(yōu)化
        3.4.5 基于AgNPRs刻蝕的pELISA的性能分析
        3.4.6 基于AgNPRs刻蝕的pELISA在牛奶基質中的性能分析
    3.5 結論
第4章 結論與展望
    4.1 結論
        4.1.1 抗DAN單克隆抗體的制備及評價
        4.1.2 基于AgNPRs的pELISA靈敏檢測DAN
    4.2 展望
致謝
參考文獻
附錄1 儀器設備
附錄2 實驗試劑
個人簡介
攻讀學位期間的研究成果



本文編號：3796374