H9N2亞型禽流感(AI)持續(xù)在我國(guó)雞群中廣泛流行,不僅可以感染禽類(lèi),還可以感染哺乳動(dòng)物以及人類(lèi),為了明確山東及周邊養(yǎng)殖場(chǎng)H9N2亞型禽流感病毒(AIV)的分子進(jìn)化情況及其致病性,本研究在2016年²019年間從山東及周邊養(yǎng)殖場(chǎng)病雞、病鴨等分離鑒定出37株H9N2 AIV,經(jīng)病毒純化后,將病毒各基因片段進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增和克隆測(cè)序,獲得各分離株全基因組序列,并進(jìn)行遺傳演化和重要的氨基酸位點(diǎn)的變異分析。結(jié)果顯示:37株H9N2 AIV 8個(gè)基因片段均屬于歐亞譜系,但8個(gè)基因片段的分子進(jìn)化關(guān)系呈現(xiàn)出基因多樣性:37株HA和NA基因來(lái)自Y280-like;HA基因之間的核苷酸同源性為92.2%⁹9.9%,NA基因之間的核苷酸同源性為90.6%⁹9.9%;M、NS基因來(lái)自G1-like;PA、NP、PB1基因來(lái)自F98-like;PB2基因來(lái)自G9-like。HA蛋白的受體結(jié)合位點(diǎn)149、198、234和235位點(diǎn)變異最多,37株分離株HA第234位氨基酸(相當(dāng)于H3第226位氨基酸)全部由Q突變?yōu)長(zhǎng),235位點(diǎn)全部突變?yōu)镸,...

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
第一部分 文獻(xiàn)綜述
    1 禽流感病毒概述
        1.1 流感病毒特點(diǎn)與分類(lèi)
        1.2 流感病毒的流行史
        1.3 主要蛋白
    2 流感病毒受體
    3 H9N2 AIV突變及致病性
    4 分子模擬技術(shù)在流感病毒突變研究中的應(yīng)用
    5 研究目的和意義
第二部分 試驗(yàn)研究
    第一章 H9N2 亞型AIV的全基因組測(cè)序、遺傳進(jìn)化與抗原變異分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 引物設(shè)計(jì)
            1.3 H9N2 亞型AIV的鑒定
            1.4 病毒的純化
            1.5 提取病毒RNA
            1.6 PCR產(chǎn)物膠回收
            1.7 連接與轉(zhuǎn)化
            1.8 菌液PCR鑒定
            1.9 序列分析
            1.10 H9N2 AIV抗原性分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 病毒的分離與鑒定
            2.2 序列測(cè)序結(jié)果
            2.3 抗原性分析結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
    第二章 H9N2 亞型AIV的致病性分析
        1 材料與方法
            1.1 試驗(yàn)材料
            1.2 H9N2 AIV的生物學(xué)測(cè)定
            1.3 H9N2 AIV感染SPF雞的研究
            1.4 H9N2 AIV感染BALB/c雌鼠的研究
        2 結(jié)果與分析
            2.1 雞胚半數(shù)感染量(EID50)測(cè)定結(jié)果
            2.2 組織半數(shù)感染量(TCID50)測(cè)定
            2.3 H9N2 AIV感染SPF雞的研究
            2.4 H9N2 AIV感染BALB/c雌鼠的研究
        3 討論
        4 小結(jié)
    第三章 HA關(guān)鍵突變位點(diǎn)預(yù)測(cè)與HA差異互作宿主蛋白篩選
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 受體結(jié)合位點(diǎn)關(guān)鍵氨基酸突變位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            1.3 突變質(zhì)粒的構(gòu)建
            1.4 突變病毒的拯救及鑒定
            1.5 突變毒株TCID50測(cè)定
            1.6 突變毒株復(fù)制動(dòng)力學(xué)
            1.7 H9N2 AIV變異HA蛋白差異互作宿主蛋白篩選
        2 結(jié)果與分析
            2.1 HA受體結(jié)合位點(diǎn)關(guān)鍵氨基酸突變位點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果
            2.2 突變毒株拯救結(jié)果
            2.3 突變毒株TCID50測(cè)定結(jié)果
            2.4 突變株CK/SD/903(N218Q)復(fù)制動(dòng)力學(xué)
            2.5 H9N2 AIV變異HA蛋白互作宿主差異蛋白鑒定結(jié)果
        3 討論
        4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論著
附錄
參與課題情況



本文編號(hào)：3790251