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河南省PRV血清學(xué)調(diào)查及鑒別野毒/疫苗毒株二重FQ-PCR方法的建立

發(fā)布時(shí)間:2023-03-29 22:29
  為了更好的了解河南省豬偽狂犬的流行狀況,本次調(diào)查通過(guò)對(duì)本實(shí)驗(yàn)室2007-2014年以來(lái)血清學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行匯總,按照不同時(shí)間、不同地區(qū)、不同生長(zhǎng)階段豬群劃分,從時(shí)間、空間、畜間三個(gè)角度全面分析近幾年河南省PR的流行趨勢(shì)。比較分析得出:2007年-2010年河南省豬偽狂犬g E抗體陽(yáng)性率呈逐年下降趨勢(shì),但在2010年以后河南省豬偽狂犬g E抗體陽(yáng)性率持續(xù)升高;將2014年檢測(cè)1373頭豬血清抗體數(shù)據(jù),按照區(qū)域劃分為豫東、豫西、豫北、豫南、豫中5個(gè)地區(qū),結(jié)果顯示豫北地區(qū)PRV野毒感染率高達(dá)66.67%,其次是豫中和豫南地區(qū)分別59.51%、53.9%;將2014年766頭背景清晰的血清學(xué)數(shù)據(jù),按照豬不同飼養(yǎng)階段進(jìn)行分群,得出母豬和后備母豬的陽(yáng)性率分別高達(dá)64.21、50%,其次是育肥豬野毒的陽(yáng)性率為49.01%。雖然疫苗的免疫接種是預(yù)防和控制豬偽狂犬病的根本措施,但近幾年P(guān)R仍呈高爆發(fā)趨勢(shì),因此如何鑒別野毒和疫苗毒株感染成為了一個(gè)重要的問(wèn)題。本研究根據(jù)Gen Bank中PRV-g D/g E基因序列,選取高度保守序列設(shè)計(jì)2對(duì)特異性引物和2條MGB探針。采用矩陣法篩選最佳引物和探針濃度,優(yōu)化最佳退...

【文章頁(yè)數(shù)】:50 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 病毒的基本特征
        1.1.1 病原特點(diǎn)
        1.1.2 結(jié)構(gòu)蛋白與功能
    1.2 流行特點(diǎn)
        1.2.1 傳染源
        1.2.2 易感動(dòng)物
        1.2.3 傳播途徑
        1.2.4 流行現(xiàn)狀
    1.3 診斷方法
        1.3.1 病原分離鑒定
        1.3.2 動(dòng)物接種
        1.3.3 血清學(xué)方法
        1.3.4 分子生物學(xué)方法
    1.4 防控現(xiàn)狀
        1.4.1 加強(qiáng)日常管理
        1.4.2 減少應(yīng)激因素
        1.4.3 制定合理的免疫程序,使用高質(zhì)量疫苗
        1.4.4 豬群的凈化
第2章 河南省豬偽狂犬病血清學(xué)調(diào)查
    2.1 數(shù)據(jù)來(lái)源及調(diào)查方法
        2.1.1 數(shù)據(jù)來(lái)源
        2.1.2 調(diào)查方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 不同年份豬偽狂犬gE抗體陽(yáng)性率
        2.2.2 不同地區(qū)豬場(chǎng)偽狂犬gE抗體陽(yáng)性率
        2.2.3 不同豬群偽狂犬gE抗體陽(yáng)性率
    2.3 討論
        2.3.1 2007-2014年河南省PRV流行趨勢(shì)
        2.3.2 2014年河南各地區(qū)PRV gE抗體陽(yáng)性率
        2.3.3 不同生長(zhǎng)階段豬群PRVg E抗體陽(yáng)性率
第3章 鑒別豬偽狂犬野毒/疫苗株二重FQ-PCR方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 菌(毒)株及樣品
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 引物和探針的設(shè)計(jì)與合成
        3.2.2 PRV標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性模板的制備
        3.2.3 反應(yīng)條件的優(yōu)化
        3.2.4 靈敏度測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.5 特異性試驗(yàn)
        3.2.6 穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)
        3.2.7 臨床應(yīng)用試驗(yàn)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 PCR擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.2 菌液鑒定結(jié)果
        3.3.3 質(zhì)粒DNA濃度的測(cè)定
        3.3.4 最佳反應(yīng)體系和條件的確定
        3.3.5 靈敏度測(cè)定及標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.3.6 特異性試驗(yàn)
        3.3.7 穩(wěn)定性和重復(fù)性試驗(yàn)
        3.3.8 臨床應(yīng)用試驗(yàn)
    3.4 討論
第4章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號(hào):3774619

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