多聚免疫球蛋白受體（pIgR）影響豬流行性腹瀉病毒復制的分子機理
發(fā)布時間：2023-03-28 23:38
豬流行性腹瀉病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一種能引起哺乳仔豬嚴重腹瀉甚至死亡的高度接觸性腸道冠狀病毒,對當前新生仔豬健康造成了嚴重的威脅。PEDV主要通過靶向入侵豬腸道中腸絨毛上皮細胞,破壞其粘膜免疫系統(tǒng)屏障而引起仔豬發(fā)病。分泌型免疫球蛋白(sIgs)介導的粘膜免疫應答在控制PEDV感染過程中發(fā)揮著重要的作用,而sIgs的分泌主要取決于多聚免疫球蛋白受體(p IgR),因此,探究pIgR在病毒感染復制過程中的作用,對解析PEDV的致病機理具有重要價值。sIgs主要依賴p IgR分泌至腸腔以抵御腸道病原微生物的入侵。為了解p IgR在PEDV感染后的表達情況,我們在前期PEDV FJzz1株感染試驗的基礎上,選取PEDV感染組與正常對照組試驗仔豬的不同腸段,檢測各腸段中p IgR的mRNA變化情況。結果顯示,與正常對照組相比,PEDV感染組仔豬不同腸段內(nèi)pIgR的mRNA水平均顯著增加,表明PEDV感染后顯著上調(diào)宿主體內(nèi)p IgR的轉(zhuǎn)錄。在體外,我們將PEDV FJzz1株感染宿主細胞LLC-PK1分析了pIg R表達變化。結果顯示,F...
【文章頁數(shù)】：68 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 緒論
1.1 豬流行性腹瀉簡介
1.1.1 豬流行性腹瀉病毒基因組及病毒結構
1.1.2 豬流行性腹瀉病毒侵染細胞的過程
1.1.3 PEDV與粘膜免疫
1.2 多聚免疫球蛋白受體
1.2.1 pIgR基本結構與功能
1.2.2 pIgR表達的調(diào)節(jié)通路
1.2.3 pIgR在病原感染中的作用
1.3 研究目的與意義
第二章 pIgR對 PEDV體外增殖的影響
2.1 材料
2.1.1 病毒、抗體、細胞、質(zhì)粒和菌株
2.1.2 感染仔豬小腸組織和實驗動物
2.1.3 主要試劑
2.2 試驗方法
2.2.1 病毒感染與組織處理
2.2.2 總RNA的提取
2.2.3 反轉(zhuǎn)錄
2.2.4 相對熒光定量PCR檢測
2.2.5 pIgR表達載體的構建
2.2.6 SDS-PAGE電泳及Western blot
2.2.7 pIgR多抗的制備與鑒定
2.2.8 過表達pIgR對 PEDV增殖的影響
2.2.9 敲低內(nèi)源性pIgR對 PEDV增殖的影響
2.2.10 pIgR缺失細胞系的構建
2.2.11 缺失pIgR對PEDV增殖的影響
2.2.12 數(shù)據(jù)分析
2.3 結果
2.3.1 豬源pIgR基因的擴增
2.3.2 pIgR基因的序列分析
2.3.3 pIgR編碼蛋白的抗原性分析
2.3.4 pIgR的原核表達、純化與pIgR多克隆抗體的制備
2.3.5 p3×FLAG-pIgR真核表達質(zhì)粒的構建及表達鑒定
2.3.6 pIgR多抗的IFA鑒定
2.3.7 pIgR多抗的Western Blot鑒定
2.3.8 pIgR在 PEDV感染仔豬腸組織中的表達變化
2.3.9 PEDV感染宿主細胞pIgR表達變化
2.3.10 PEDV感染Vero細胞pIgR表達變化
2.3.11 過量表達pIgR可促進PEDV增殖
2.3.12 敲低內(nèi)源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.3.13 pIgR缺失細胞系的構建
2.3.14 缺失內(nèi)源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.4 討論
第三章 PEDV調(diào)控pIgR表達的分子途徑初步研究
3.1 材料與方法
3.1.1 病毒與細胞
3.1.2 主要試劑
3.1.3 主要儀器
3.1.4 引物設計
3.1.5 熒光定量PCR檢測
3.1.6 Western blot分析
3.2 結果與分析
3.2.1 PEDV感染后參與調(diào)控pIgR表達相關分子轉(zhuǎn)錄水平變化
3.2.2 TNF-α呈劑量依賴性促進pIgR表達
3.2.3 PEDV對 NF-κB途徑的影響
3.2.4 泛素蛋白酶體抑制劑MG132 處理對pIgR表達的影響
3.3 討論
第四章 全文結論
參考文獻
致謝
作者簡介
本文編號：3773524
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【學位級別】：碩士
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摘要
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英文縮略表
第一章 緒論
1.1 豬流行性腹瀉簡介
1.1.1 豬流行性腹瀉病毒基因組及病毒結構
1.1.2 豬流行性腹瀉病毒侵染細胞的過程
1.1.3 PEDV與粘膜免疫
1.2 多聚免疫球蛋白受體
1.2.1 pIgR基本結構與功能
1.2.2 pIgR表達的調(diào)節(jié)通路
1.2.3 pIgR在病原感染中的作用
1.3 研究目的與意義
第二章 pIgR對 PEDV體外增殖的影響
2.1 材料
2.1.1 病毒、抗體、細胞、質(zhì)粒和菌株
2.1.2 感染仔豬小腸組織和實驗動物
2.1.3 主要試劑
2.2 試驗方法
2.2.1 病毒感染與組織處理
2.2.2 總RNA的提取
2.2.3 反轉(zhuǎn)錄
2.2.4 相對熒光定量PCR檢測
2.2.5 pIgR表達載體的構建
2.2.6 SDS-PAGE電泳及Western blot
2.2.7 pIgR多抗的制備與鑒定
2.2.8 過表達pIgR對 PEDV增殖的影響
2.2.9 敲低內(nèi)源性pIgR對 PEDV增殖的影響
2.2.10 pIgR缺失細胞系的構建
2.2.11 缺失pIgR對PEDV增殖的影響
2.2.12 數(shù)據(jù)分析
2.3 結果
2.3.1 豬源pIgR基因的擴增
2.3.2 pIgR基因的序列分析
2.3.3 pIgR編碼蛋白的抗原性分析
2.3.4 pIgR的原核表達、純化與pIgR多克隆抗體的制備
2.3.5 p3×FLAG-pIgR真核表達質(zhì)粒的構建及表達鑒定
2.3.6 pIgR多抗的IFA鑒定
2.3.7 pIgR多抗的Western Blot鑒定
2.3.8 pIgR在 PEDV感染仔豬腸組織中的表達變化
2.3.9 PEDV感染宿主細胞pIgR表達變化
2.3.10 PEDV感染Vero細胞pIgR表達變化
2.3.11 過量表達pIgR可促進PEDV增殖
2.3.12 敲低內(nèi)源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.3.13 pIgR缺失細胞系的構建
2.3.14 缺失內(nèi)源性pIgR抑制PEDV的增殖
2.4 討論
第三章 PEDV調(diào)控pIgR表達的分子途徑初步研究
3.1 材料與方法
3.1.1 病毒與細胞
3.1.2 主要試劑
3.1.3 主要儀器
3.1.4 引物設計
3.1.5 熒光定量PCR檢測
3.1.6 Western blot分析
3.2 結果與分析
3.2.1 PEDV感染后參與調(diào)控pIgR表達相關分子轉(zhuǎn)錄水平變化
3.2.2 TNF-α呈劑量依賴性促進pIgR表達
3.2.3 PEDV對 NF-κB途徑的影響
3.2.4 泛素蛋白酶體抑制劑MG132 處理對pIgR表達的影響
3.3 討論
第四章 全文結論
參考文獻
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本文編號：3773524
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