羊口瘡,又名羊傳染性膿皰病(Contagious Ecthyma),是痘病毒科(Poxviridae)副痘病毒屬(Parapoxvirus)中的羊口瘡病毒(Orf virus,ORFV)所引起的一種接觸傳染性疾病。使用DNAstar軟件中Protean功能對(duì)GenBank上發(fā)表的羊口瘡病毒表面囊膜蛋白B2L基因序列進(jìn)行分析,將B2L基因全長命名為B2L-1,篩選出高度親水的優(yōu)勢表位區(qū)命名為B2L-2。對(duì)B2L-1、B2L-2編碼基因進(jìn)行大腸桿菌偏愛性密碼子優(yōu)化,通過基因合成手段,將His-tag及B2L-1、B2L-2基因分別連接到pET32a(+)載體上,構(gòu)建成原核表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化至BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,進(jìn)行原核表達(dá),并優(yōu)化了表達(dá)條件,后通過Ni-NTAAgarose親和純化柱進(jìn)行純化。將B2L-1、B2L-2蛋白分別免疫羔羊,以獲得陽性血清,并將純化的重組融合蛋白用作包被抗原,建立檢測羊口瘡病毒抗體的間接ELISA方法,優(yōu)化了 ELISA條件。SDS-PAGE結(jié)果表明,成功獲得了具有良好可溶性和高表達(dá)效率的重組融合蛋白B2L-1和截短的B2L-2蛋白;Western Bol...

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 羊口瘡綜述
        1.1.1 病毒特征
        1.1.2 基因結(jié)構(gòu)
        1.1.3 主要的基因簡介
        1.1.4 流行病學(xué)
        1.1.5 感染機(jī)制
        1.1.6 免疫特性
        1.1.7 免疫逃避策略
        1.1.8 臨床癥狀
        1.1.9 病理組織學(xué)變化
        1.1.10 診斷方法
        1.1.11 研究進(jìn)展
    1.2 B2L基因密碼子優(yōu)化及截短
        1.2.1 密碼子優(yōu)化概念
        1.2.2 密碼子影響蛋白表達(dá)條件
    1.3 研究意義與目的
2 材料和方法
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 密碼子優(yōu)化及截短
        2.2.2 重組蛋白表達(dá)
        2.2.3 重組蛋白純化
        2.2.4 重組蛋白Western Blot鑒定
        2.2.5 重組蛋白瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 基于B2L-1、B2L-2抗原的間接ELISA檢測方法的建立
        2.2.7 中和試驗(yàn)檢驗(yàn)
3 結(jié)果與分析
    3.1 B2L基因截短與命名
    3.2 B2L-1、B2L-2蛋白原核表達(dá)結(jié)果
    3.3 B2L-1、B2L-2蛋白純化SDS-PAGE結(jié)果
    3.4 B2L-1、B2L-2 Western Blot結(jié)果
    3.5 B2L-1、B2L-2蛋白瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)
    3.6 最佳蛋白包被量和一抗最佳稀釋度的確定
    3.7 最佳封閉液及最佳二抗稀釋度的確定
    3.8 最佳底物顯色時(shí)間的確定
    3.9 臨界值的確定
    3.10 敏感性試驗(yàn)
    3.11 批內(nèi)試驗(yàn)和批間試驗(yàn)
    3.12 中和試驗(yàn)結(jié)果
    3.13 ELISA方法檢測結(jié)果與中和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)比
4 討論
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡介



本文編號(hào)：3766176