胚胎發(fā)育過程中樞神經系統(tǒng)的發(fā)育存在大量神經元的形成和遷移，而神經元形成和遷移受到眾多分子的調控，其中細胞粘附分子鈣粘蛋白家族成員發(fā)揮重要作用。神經鈣粘蛋白(N-Cadherin)最初在雞胚神經管中被發(fā)現，是鈣粘蛋白家族成員之一，在中樞神經系統(tǒng)發(fā)育過程中扮演重要角色。在中樞神經系統(tǒng)形成過程新生細胞向神經元分化或新生神經元遷移異常會導致神經系統(tǒng)發(fā)育異常，因此，研究導致神經元分化或遷移異常的分子機制成為發(fā)育神經生物學研究的熱點。本研究以N-Cadherin為關鍵分子，通過活體電轉基因技術，實現雞胚發(fā)育過程N-Cadherin在中樞神經系統(tǒng)中的異常表達，分析其異常表達后對軸突形成和神經元遷移的影響，進一步探討N-Cadherin在神經系統(tǒng)發(fā)育過程中的功能調控。研究結果如下： 1.成功建立了雞胚的帶殼培養(yǎng)和去殼培養(yǎng)方法，同時也建立和優(yōu)化了活體電轉基因技術，實現了目的基因在脊髓和視頂蓋中的表達，該方法適用于脊髓最佳轉染時間在E2.5-E3(HH stage18-24)，視頂蓋最佳轉染時間在E5(HH stage27)，脊髓轉染陽性表達率達到54.5%，視頂蓋轉染陽性表達率達到60%，完全可以達到實...

【文章頁數】：113 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
綜述部分
    第一章 鈣粘蛋白研究進展
        1.1 鈣粘蛋白的發(fā)現
        1.2 鈣粘蛋白的分類
            1.2.1 經典鈣粘蛋白
            1.2.2 原鈣粘蛋白
        1.3 鈣粘蛋白研究進展
            1.3.1 經典鈣粘蛋白研究進展
            1.3.2 原鈣粘蛋白研究進展
        1.4 鈣粘蛋白在中樞神經系統(tǒng)中的功能
            1.4.1 經典鈣粘蛋白在中樞神經系統(tǒng)中的功能
            1.4.2 原鈣粘蛋白在中樞神經系統(tǒng)中的功能
        1.5 鈣粘蛋白研究展望
        1.6 小結
實驗研究
    第二章 雞胚培養(yǎng)及活體電轉基因技術的建立
        2.1 材料和方法
            2.1.1 材料與儀器
            2.1.2 方法
        2.2 結果
            2.2.1 雞胚胎培養(yǎng)
            2.2.2 活體電轉基因技術
        2.3 討論
        2.4 小結
    第三章 雞胚活體原位電轉基因技術對不同啟動子及報告基因 GFP 表達的質量評估
        3.1 材料和方法
            3.1.1 材料與儀器
            3.1.2 方法
        3.2 結果
            3.2.1 三種質粒啟動子的生物信息學分析
            3.2.2 雞胚發(fā)育過程三種質粒表達強度差異分析
            3.2.3 組織切片上對 3 種不同質粒在脊髓中表達強度的分析
            3.2.4 各組間雞胚胎發(fā)育形態(tài)結構的比較
            3.2.5 GFP 表達對α-平滑肌肌動蛋白表達的影響
            3.2.6 GFP 表達對神經絲蛋白表達的影響
        3.3 討論
        3.4 小結
    第四章 N-Cadherin 真核表達載體的篩選及其在 293T 細胞中表達效率的分析
        4.1 材料和方法
            4.1.1 材料與儀器
            4.1.2 方法
        4.2 結果
            4.2.1 干擾載體的篩選
            4.2.2 N-Cadherin 的異常表達及其對細胞形態(tài)結構的影響
            4.2.3 N-Cadherin 的異常表達對 catenin 的調控
            4.2.4 N-Cadherin 的異常表達對細胞骨架蛋白的影響
            4.2.5 N-Cadherin 異常表達后細胞凋亡的檢測
        4.3 討論
        4.4 小結
    第五章 雞胚發(fā)育過程 N-Cadherin 在中樞神經系統(tǒng)的表達模式
        5.1 材料和方法
            5.1.1 材料與儀器
            5.1.2 方法
        5.2 結果
            5.2.1 神經鈣粘蛋白在脊髓中的表達
            5.2.2 神經絲蛋白在脊髓中的表達及其與 N-Cadherin 表達的異同
            5.2.3 神經鈣粘蛋白在視頂蓋中的表達模式
            5.2.4 神經絲蛋白在視頂蓋中的表達模式及其與 N-Cadherin 表達的異同
        5.3 討論
        5.4 小結
    第六章 雞胚發(fā)育過程 N-Cadherin 異常表達對脊髓神經軸突投射的影響
        6.1 材料和方法
            6.1.1 材料
            6.1.2 方法
        6.2 結果
            6.2.1 N-Cadherin 在雞胚脊髓中的超表達和下調表達
            6.2.2 全脊髓展開實驗結果
            6.2.3 N-Cadherin 異常表達對脊髓中 catenin 表達的影響
            6.2.4 N-Cadherin 和β-catenin 異常表達對脊髓神經突起向對側投射的影響
            6.2.5 脊髓中 N-Cadherin 異常表達對脊髓相關蛋白表達的影響
        6.3 討論
        6.4 小結
    第七章 雞胚發(fā)育過程 N-Cadherin 異常表達對視頂蓋神經元遷移的影響
        7.1 材料與方法
            7.1.1 材料與儀器
            7.1.2 方法
        7.2 結果
            7.2.1 雞胚視頂發(fā)育過程中神經元增殖、遷移和分層形成規(guī)律的研究
            7.2.2 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達或下調表達
            7.2.3 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達或下調表達對 NF 表達的影響
            7.2.4 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達或下調表達對β-catenin 表達的影響
            7.2.5 N-Cadherin 在視頂蓋中的超表達或下調表達對 Pax-7 表達的影響
        7.3 討論
        7.4 小結
結論與創(chuàng)新點
參考文獻
主要縮略詞和中英文對照表（Abbreviation Index）
附錄
致謝
作者簡介



本文編號：3765832