綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,Mo)是引起綿羊、山羊呼吸系統(tǒng)感染并導致非典型性肺炎的主要病原菌,給全球養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。接種疫苗是防治該病最為有效的方式,而制約疫苗行業(yè)發(fā)展的瓶頸是Mo大量體外培養(yǎng)難的問題,因此,如何提高Mo的生長滴度是亟待解決的問題。在我國,羊支原體性肺炎主要由綿羊肺炎支原體和絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)引起。但在相同培養(yǎng)條件下,Mmc較Mo具有易于培養(yǎng),生長滴度高等優(yōu)勢。因此,本研究采用Illumina公司的HiSeq測序平臺分別對Mo NM-151分離株和Mmc PG3標準株不同生長階段(對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期)的樣本進行轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)及生物信息學分析,通過分析比較測序結(jié)果,在基因?qū)用嬲页鯩mc易于Mo培養(yǎng)的關(guān)鍵因素,并以此為依據(jù)提出Mo培養(yǎng)基的改良方案,并通過培養(yǎng)試驗進行驗證。1.結(jié)合差異表達基因富集的KEGG PATHWAY和通路中部分基因的RPKM值對Mo NM-151分離株和Mmc PG3標準株的轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果進行分析比較,發(fā)現(xiàn)葡萄糖...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略語表
1 引言
    1.1 支原體研究進展
    1.2 支原體的生物學特性
        1.2.1 分類學和形態(tài)學特征
        1.2.2 培養(yǎng)特性及染色
        1.2.3 遺傳特性
        1.2.4 支原體的抗性
    1.3 支原體的致病機理
    1.4 支原體的流行概況
        1.4.1 流行病學
        1.4.2 臨床癥狀
        1.4.3 病理變化
    1.5 實驗室診斷
        1.5.1 病原的分離培養(yǎng)
        1.5.2 免疫學診斷
        1.5.3 分子生物學診斷
    1.6 防治
    1.7 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)的研究概況
    1.8 Mo培養(yǎng)基的研究概況
    1.9 本研究的目的、意義及內(nèi)容
2 研究一MoNM-151株與MmcPG3株轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的分析比較
    2.1 試驗材料
    2.2 試驗方法
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 葡萄糖代謝
        2.3.2 核苷酸代謝
    2.4 討論
        2.4.1 葡萄糖代謝
        2.4.3 核苷酸代謝
    2.5 小結(jié)
3 研究二添加葡萄糖、絲氨酸的培養(yǎng)效果
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌種來源
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 試驗方法
        3.2.1 培養(yǎng)基的配制
        3.2.2 Mo的接種及培養(yǎng)
        3.2.3 測量OD_630nm值最佳離心時間的篩選
        3.2.4 Mo生長滴度的測定
        3.2.5 pH值的測定
        3.2.6 OD_630nm值的測定
        3.2.7 數(shù)據(jù)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 最佳離心時間的篩選
        3.3.2 生長曲線的繪制
        3.3.3 pH值的測定
        3.3.4 OD630nm值的測定
    3.4 討論
    3.5 小結(jié)
4 研究三緩沖體系的篩選及Mo培養(yǎng)基的改良
    4.1 緩沖體系的篩選
        4.1.1 試驗材料
        4.1.2 試驗方法
        4.1.3 結(jié)果與分析
        4.1.4 討論
    4.2 Mo培養(yǎng)基的改良
        4.2.1 試驗材料
        4.2.2 試驗方法
        4.2.3 結(jié)果與分析
        4.2.4 討論
    4.3 改良培養(yǎng)基初始pH值的影響
        4.3.1 試驗材料
        4.3.2 試驗方法
        4.3.3 Mo的接種及培養(yǎng)
        4.3.4 結(jié)果與分析
    4.4 討論
    4.5 小結(jié)
5 總體討論
6 全文結(jié)論
致謝
參考文獻
作者簡介



本文編號：3764133