自從1997年世界首例體細(xì)胞克隆綿羊多莉誕生以來,體細(xì)胞核移植技術(shù)在多個(gè)物種中得以成功實(shí)踐。轉(zhuǎn)基因技術(shù)與體細(xì)胞克隆技術(shù)相結(jié)合是目前制備轉(zhuǎn)基因大動(dòng)物的主要手段。但由于克隆技術(shù)體系并不完善,至今仍未克服克隆效率低的問題。而轉(zhuǎn)基因技術(shù)的介入,使得轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)又增加了更多的變數(shù)。在轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備過程中出現(xiàn)了很多問題,如胚胎移植后妊娠率低、流產(chǎn)率高、胎兒發(fā)育異常、出生死亡率高等。而外源基因整合效率低,以及外源基因的沉默或丟失等現(xiàn)象更加制約了這項(xiàng)技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用。在總結(jié)了大量的前期工作的基礎(chǔ)上,我們對(duì)以牛為主的體細(xì)胞克隆體系進(jìn)行了系統(tǒng)的改進(jìn)與調(diào)整。包括卵母細(xì)胞的成熟、去核時(shí)間段的選擇、重構(gòu)胚激活處理方式、胚胎培養(yǎng)、受體母牛的發(fā)情狀態(tài)與胚胎發(fā)育時(shí)期的匹配等都進(jìn)行了改進(jìn),形成了一套較為完整的牛體細(xì)胞克隆技術(shù)體系。利用改進(jìn)的技術(shù)體系開展了大規(guī)模的轉(zhuǎn)基因克隆牛生產(chǎn)。共完成對(duì)33043枚卵母細(xì)胞的去核與注核操作,得到融合胚胎26548枚,生產(chǎn)出各種轉(zhuǎn)基因克隆囊胚7519枚,規(guī)�；寺∧遗咝蕿�28.3%。共移植受體牛1523頭,妊娠414頭,妊娠率為27.2%。通過將體細(xì)胞克隆技術(shù)的系統(tǒng)改進(jìn)與大規(guī)模的轉(zhuǎn)基因...

【文章頁數(shù)】：99 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
引言
    參考文獻(xiàn)
第一部分 研究論文
    第一章 牛體細(xì)胞核移植技術(shù)的改進(jìn)與優(yōu)化
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第二章 克隆胚胎的選擇與受體母牛發(fā)情狀態(tài)的匹配
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    第三章 多不飽和脂肪酸去飽和酶基因轉(zhuǎn)基因克隆牛的制備
        摘要
        前言
        1 材料和方法
        2 結(jié)果
        3 討論
        參考文獻(xiàn)
    結(jié)論
第二部分 文獻(xiàn)綜述
    第一章 體細(xì)胞核移植研究進(jìn)展
        1 體細(xì)胞核移植的發(fā)展歷程
        2 牛體細(xì)胞核移植的研究進(jìn)展
        3 體細(xì)胞核移植技術(shù)在應(yīng)用中存在的問題
        4 體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景
    第二章 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究概論
        1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物研究進(jìn)展
        2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的制作方法
        3 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的后期檢測(cè)
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文



本文編號(hào)：3762313