豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS,俗稱豬藍(lán)耳病)是嚴(yán)重危害全世界生豬養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的疫病。多年來(lái)PRRSV在我國(guó)長(zhǎng)期且大范圍流行并且已經(jīng)造成極為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。本研究的目的就是利用抗PRRSV M蛋白的單克隆抗體、通過(guò)捕獲PRRSV抗原來(lái)確立一種ELISA檢測(cè)技術(shù),主要用于PRRS的診斷和監(jiān)測(cè),同時(shí)對(duì)該單克隆抗體進(jìn)行純化和輕鏈重鏈編碼序列測(cè)定并與Pub Med上已公布的小鼠抗體編碼基因進(jìn)行比對(duì)。結(jié)果主要包括以下幾方面:1、通過(guò)對(duì)純化后單抗亞型鑒定,該單抗亞型為IgG2b,而后用Protein G Resin層析柱來(lái)純化Ig G。純化后的PRRSV Anti-M-Mab凝膠電泳圖中條帶清楚且無(wú)雜帶,說(shuō)明純化后的Anti-M-Mab純度較高,雜蛋白較少。另外,對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行基因組測(cè)序,結(jié)果驗(yàn)證該單克隆抗體為胚系基因所編碼,序列比對(duì)顯示其整體編碼序列與胚系可變區(qū)基因的同源性高達(dá)99%,無(wú)體細(xì)胞突變和親和力成熟的過(guò)程。2、將SD16,GD-HD,JXA1,VR2332,VR2385,CH1a,NADC30L-Lik分別接種于易感細(xì)胞Mac145,通過(guò)IFA用雜交瘤上清檢測(cè)上述毒株,結(jié)果可知上述7種毒株...

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要 abstract 第一章 豬繁殖與呼吸綜合征研究進(jìn)展
1.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)
    1.1.1 豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分類
    1.1.2 PRRSV病毒的分子生物學(xué)特性
1.2 豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)及其流行病學(xué)調(diào)查
1.3 PRRSV的流行病學(xué)調(diào)查
    1.3.1 國(guó)外PRRSV流行病學(xué)調(diào)查及分子生物學(xué)特征
    1.3.2 國(guó)內(nèi)PRRSV流行病學(xué)現(xiàn)狀及毒株的分子生物學(xué)特征
1.4 PRRSV抗體及病原診斷方法研究進(jìn)展
    1.4.1 PRRSV的血清學(xué)診斷
    1.4.2 PRRSV的病原診斷
    1.4.3 比較與討論 第二章 ANTI-M-MAB單克隆抗體的純化與鑒定
2.1 材料
    2.1.1 雜交瘤細(xì)胞
    2.1.2 主要儀器
    2.1.3 主要試劑
    2.1.4 主要試劑的配制
2.2 實(shí)驗(yàn)方法
    2.2.1 雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清的純化
    2.2.2 單克隆抗體Anti-M-Mab的亞型鑒定
    2.2.3 雜交瘤細(xì)胞中RNA的提取及測(cè)序
2.3 結(jié)果
    2.3.1 單克隆抗體亞型鑒定
    2.3.2 SDS-PAGE檢測(cè)純化后的抗體的純度
    2.3.3 純化抗體的濃度測(cè)定
    2.3.4 RNA提取及測(cè)序結(jié)果
2.4 討論 第三章 ANTI-M-MAB單克隆抗體對(duì)不同PRRSV毒株的反應(yīng)性檢測(cè)
3.1 材料
    3.1.1 病毒與細(xì)胞
    3.1.2 主要設(shè)備和儀器
    3.1.3 主要試劑
    3.1.4 主要試劑的配制
3.2 實(shí)驗(yàn)方法
    3.2.1 Mac145細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.2.2 PRRSV增殖與病毒滴度測(cè)定
    3.2.3 用間接免疫熒光(IFA)的方法檢測(cè)Anti-M-Mab與不同毒株的反應(yīng)性
    3.2.4 用間接ELISA的方法檢測(cè)Anti-M-Mab識(shí)別的抗原表位的性質(zhì)
3.3 結(jié)果
    3.3.1 M與PRRSV不同毒株的反應(yīng)結(jié)果
    3.3.2 Anti-M-Mab所識(shí)別的表位性質(zhì)
3.4 討論 第四章 雙抗夾心ELISA檢測(cè)方法的建立與優(yōu)化
4.1 材料
    4.1.1 主要設(shè)備與儀器
    4.1.2 主要試劑
    4.1.3 主要試劑與配置
4.2 實(shí)驗(yàn)方法
4.3 結(jié)果
    4.3.1 雙抗夾心ELISA條件摸索
    4.3.2 雙抗夾心ELISA檢測(cè)PRRSV不同毒株
    4.3.3 最低檢出量的確定
4.4 討論 參考文獻(xiàn) 附錄 縮略詞 致謝 作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3758497