本文關(guān)鍵詞：CTX-M型多重耐藥雞大腸埃希菌致病特性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：耐藥菌是導(dǎo)致人和動物細(xì)菌感染和死亡的主要原因之一,目前國內(nèi)外學(xué)者對耐藥菌的致病力改變趨勢存在明顯爭議。雞大腸桿菌病是臨床常見的多發(fā)性疾病,其病原體為雞大腸埃希菌,尤其是多重耐藥性雞大腸埃希菌,給養(yǎng)雞業(yè)防控造成很大的困難。本試驗旨在通過對產(chǎn)CTX-M型超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamases,ESBLs)的雞大腸埃希菌的PFGE分型、O抗原血清型、毒力因子攜帶情況及代表性毒力因子的體外相對表達量的研究,探討產(chǎn)CTX-M型雞大腸埃希菌的致病特性,以期為臨床防控雞大腸桿菌病提供理論依據(jù)。本試驗對106株雞大腸埃希菌進行PFGE分型,結(jié)果表明除15株菌外,91株雞大腸埃希菌共可分為46個型,盡管親緣關(guān)系較分散,但仍存在一定的克隆關(guān)系。P12克隆株和P3克隆株為優(yōu)勢克隆株,分別占檢出菌株的13.19%和8.79%。與不產(chǎn)CTX-M的菌株相比,克隆在產(chǎn)CTX-M菌中發(fā)揮了較明顯的作用,其中CTX-M-9菌克隆傳播更為明顯,有21株菌(53.85%)分屬于4個克隆株。使用13種大腸埃希菌O抗原單因子血清檢測106株雞大腸埃希菌后,共有55株能鑒定出血清型。O8、O14和O36為本批受試菌中的常見血清型。不同CTX-M亞群的雞大腸埃希菌優(yōu)勢血清型不同,且目前河南流行的CTX-M-9菌血清型較CTX-M-1菌血清型更復(fù)雜多變。在產(chǎn)CTX-M菌中檢出了3株O26菌和4株O111菌,它們屬于非O157的產(chǎn)志賀毒素大腸埃希菌,可能會導(dǎo)致產(chǎn)CTX-M菌感染的大面積流行。以多重PCR技術(shù)檢測CTX-M-1菌、CTX-M-9菌和不產(chǎn)CTX-M菌攜帶33種毒力基因的情況。檢測結(jié)果是3類受試菌毒力基因的攜帶種類趨于一致,其中feoB、fimH、traT和sitA在3類菌中檢出率均較高。CTX-M-1亞群雞大腸埃希菌中traT和irp-2基因和CTX-M-9亞群雞大腸埃希菌中iroN、iss和irp-2基因的攜帶率顯著高于不產(chǎn)CTX-M菌株。CTX-M-1亞群雞大腸埃希菌中cvaC和sfaS的攜帶率要顯著高于CTX-M-9亞群,而iroN和iss的攜帶率顯著低于CTX-M-9亞群。推測產(chǎn)CTX-M雞大腸埃希菌的致病力可能較強,且菌株的致病力可能還與其攜帶的CTX-M基因亞型有關(guān)。細(xì)菌的致病性不僅與其含有毒力基因種類及數(shù)量的多少有關(guān),還與其表達量相關(guān)。本研究通過熒光定量PCR的方法來比較毒力基因iss,iroN在三類菌體外培養(yǎng)時的相對表達量的情況,結(jié)果表明,iss和iroN在體外的表達量在這3類雞大腸埃希菌之間的差異均不顯著。綜上所述,我們分離的106株大腸埃希菌的PFGE型眾多,親緣關(guān)系較遠,仍存在一定的克隆關(guān)系,血清型較多,且攜帶很多黏附素基因、鐵相關(guān)基因、抗血清基因等各種毒力基因。本研究對河南地區(qū)雞大腸埃希菌毒力基因的流行病學(xué)有了初步的了解,對敏感菌和耐藥菌毒力的變化有了初步的探討。從攜帶的毒力因子種類與數(shù)量來看,CTX-M-1菌與CTX-M-9菌的致病性可能強于敏感菌。但是iss基因iroN基因在體外的mRNA表達量在3類菌中無明顯差異。
【關(guān)鍵詞】：雞大腸埃希菌 PFGE O抗原血清型鑒定 毒力基因 RT-PCR
【學(xué)位授予單位】：河南農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.61
【目錄】：

• 致謝5-8
• 摘要8-10
• 文獻綜述10-18
• 1 禽大腸埃希菌毒力因子種類10-14
• 1.1 黏附素11-12
• 1.2 攝鐵系統(tǒng)12
• 1.3 溶血素12
• 1.4 侵襲因子12-13
• 1.5 抗血清存活因子13
• 1.6 毒素13-14
• 2 禽大腸埃希菌毒力因子的分子流行病學(xué)14-16
• 2.1 毒力因子具有協(xié)同致病的特性14-15
• 2.2 毒力因子與血清型的相關(guān)性15
• 2.3 毒力因子與耐藥性的相關(guān)性15-16
• 2.4 菌株種系發(fā)育背景與毒力因子間的關(guān)系16
• 3 耐藥菌致病性差異的研究16-18
• 試驗一 CTX-M雞大腸埃希菌PFGE分型18-25
• 1 前言18
• 2 材料與方法18-20
• 3 結(jié)果與分析20-23
• 3.1 雞大腸埃希菌PFGE電泳圖及PFGE聚類分析圖20-22
• 3.2 PFGE型與CTX-M亞型的關(guān)系22-23
• 4 討論23-24
• 4.1 15 株雞大腸埃希菌經(jīng)PFGE處理后無結(jié)果的原因23
• 4.2 由雞大腸埃希菌PFGE型探討克隆傳播在CTX-M快速散播中的作用23-24
• 5 小結(jié)24-25
• 試驗二 CTX-M雞大腸埃希菌O抗原血清型鑒定25-31
• 1 前言25
• 2 材料與方法25-27
• 3 結(jié)果與分析27-28
• 4 討論28-30
• 4.1 55 株O抗原血清型定型菌株28-29
• 4.2 O26、O111型雞大腸埃希菌29-30
• 5 小結(jié)30-31
• 試驗三 CTX-M雞大腸埃希菌毒力基因的流行特征31-40
• 1 前言31
• 2 材料與方法31-34
• 3 結(jié)果與分析34-38
• 3.1 三類雞大腸埃希菌毒力基因的檢測結(jié)果34-38
• 3.2 三類雞大腸埃希菌毒力基因的差異分析38
• 4 討論38-39
• 5 小結(jié)39-40
• 試驗四 CTX-M雞大腸埃希菌iss和iro N毒力基因體外相對表達量研究40-49
• 1 前言40
• 2 材料與方法40-43
• 3 結(jié)果與分析43-48
• 3.1 普通PCR檢驗用于熒光定量的毒力基因的引物43-44
• 3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線44-46
• 3.3 相對表達量46-48
• 3.3.1 待測菌株gap A基因和iss基因以及iro N基因的擴增曲線和融解曲線46-47
• 3.3.2 不同菌株間iss或iro N的m RNA相對表達量47-48
• 4 討論48
• 5 小結(jié)48-49
• 全文結(jié)論49-50
• 本文創(chuàng)新點50-51
• 參考文獻51-61
• 附錄一：作者簡介及發(fā)表的文章61-62
• 附錄二：縮略詞表62-63
• ABSTRACT63-64

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7 吳

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