牛巴貝斯蟲病(Bovine babesiosis)，是由媒介蜱傳播的巴貝斯屬的多種病原引起的血液原蟲病，臨床主要表現(xiàn)為高熱、貧血、黃疸和血紅蛋白尿，嚴(yán)重感染時(shí)引起死亡。本病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給家畜及畜產(chǎn)品國(guó)際貿(mào)易帶來嚴(yán)重危害，直接影響經(jīng)濟(jì)的發(fā)展。在我國(guó)，業(yè)已報(bào)道的牛的巴貝斯蟲病的病原有雙芽巴貝斯蟲、牛巴貝斯蟲、大巴貝斯蟲、卵形巴貝斯蟲、巴貝斯蟲未定種以及東方巴貝斯蟲共6種，其中牛巴貝斯蟲與雙芽巴貝斯蟲的發(fā)病率和致死率最高，危害嚴(yán)重，而兩者均以牛蜱屬的蜱種為媒介，臨床上常常表現(xiàn)為混合感染，目前尚無有效可行的血清學(xué)診斷方法可特異性地檢測(cè)牛巴貝斯蟲的感染。本研究以牛巴貝斯蟲為研究對(duì)象，采用原核表達(dá)系統(tǒng)克隆表達(dá)了牛巴貝斯蟲RAP-1的C端蛋白，并以此蛋白為抗原建立了ELISA鑒別檢測(cè)方法，并對(duì)我國(guó)13個(gè)省牛巴貝斯蟲病的流行情況進(jìn)行了血清學(xué)調(diào)查�，F(xiàn)將研究?jī)?nèi)容總結(jié)如下： 1.利用原核表達(dá)載體pGEX-4T-1構(gòu)建重組質(zhì)粒，在大腸桿菌BL21（DE3）pLysS中成功地表達(dá)獲得了RAP-1基因的C端肽段即BORCT。融合蛋白以GST為標(biāo)簽，可溶性表達(dá)量為1.51mg/mL，Western-blo...

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1.1 病原學(xué)特征
    1.2 生活史
    1.3 病理學(xué)和致病機(jī)制
    1.4 超微結(jié)構(gòu)
    1.5 牛巴貝斯蟲的入侵機(jī)制
    1.6 牛巴貝斯蟲的血清學(xué)診斷進(jìn)展
        1.6.1 間接熒光抗體試驗(yàn)（INDIRECT FLUORESCENT ANTIBODY TEST，IFAT）
        1.6.2 免疫印跡法（WESTERN BLOTTING）
        1.6.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ENZYME LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY，ELISA）
    1.7 研究?jī)?nèi)容
第二章 牛巴貝斯蟲 RAP-1 C 端基因的克隆、表達(dá)與鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 蟲體與血清
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    2.2 方法
        2.2.1 RAP-1 基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.2 引物的設(shè)計(jì)與合成
        2.2.3 RAP -1 基因的 PCR 擴(kuò)增
        2.2.4 RAP-1 基因與 pGEM-T Easy 載體的連接與轉(zhuǎn)化
        2.2.5 表達(dá)質(zhì)粒 pBORCT 的構(gòu)建
        2.2.6 BORCT 的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.2.7 重組蛋白的可溶性分析
        2.2.8 重組蛋白的純化
        2.2.9 重組蛋白的反應(yīng)原性的檢測(cè)
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 蛋白區(qū)段的生物信息學(xué)分析
        2.3.2 目的基因的克隆
        2.3.3 重組表達(dá)菌的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.4 重組蛋白的 Western blot 鑒定
    2.4 討論
第三章 重組蛋白 BORCT 的間接 ELISA 方法的建立
    3.1 材料
        3.1.1 主要儀器
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 抗原的制備
        3.1.4 血清的采集
    3.2 方法
        3.2.1 間接 ELISA 試驗(yàn)程序
        3.2.2 ELISA 最佳反應(yīng)條件的選擇
        3.2.3 ELISA 陽性閾值和特異性、敏感性的確定
        3.2.4 特異性實(shí)驗(yàn)（交叉實(shí)驗(yàn)）
        3.2.5 抗體動(dòng)態(tài)曲線的評(píng)價(jià)
        3.2.6 野外樣品 ELISA 方法的評(píng)價(jià)
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 ELISA 最佳反應(yīng)條件的選擇
        3.3.2 ELISA 陽性閾值和異性、敏感性的確定
        3.3.3 特異性實(shí)驗(yàn)（交叉實(shí)驗(yàn)）
        3.3.4 抗體動(dòng)態(tài)曲線的評(píng)價(jià)
        3.3.5 野外樣品對(duì) ELISA 方法的評(píng)價(jià)
    3.4 討論
第四章 中國(guó)部分地區(qū)牛巴貝斯蟲的血清流行病學(xué)調(diào)查
    4.1 材料
        4.1.1 主要器材
        4.1.2 主要試劑
        4.1.3 抗原的制備
        4.1.4 血清的采集
    4.2 方法
    4.3 結(jié)果
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3752510