為建立檢測細胞培養(yǎng)物和組織切片中羊口瘡病毒(Orf virus,ORFV)的間接免疫熒光(IFA)方法,用已知滴度的ORFV感染牛睪丸上皮細胞,羊口瘡病毒單克隆抗體(anti-ORFV mAb)為一抗,熒光素標記羊抗小鼠IgG為二抗,通過反應條件的優(yōu)化,建立細胞培養(yǎng)物ORFV的IFA檢測方法,并制備ORFV感染的山羊唇部組織冰凍切片,對組織中病毒進行檢測。結(jié)果顯示,用牛睪丸上皮細胞增殖的羊口瘡病毒TCID₅₀達到10^-6.29/0.1 mL,ORFV適宜的接種滴度和培養(yǎng)條件為10^3.70 TCID₅₀ ORFV接種細胞,37℃、體積分數(shù)為5%的CO₂恒溫箱培養(yǎng)42 h,熒光素標記羊抗小鼠二抗適宜工作濃度為1∶400稀釋,此時羊口瘡病毒單抗應用于IFA檢測的特異性和靈敏度最佳,且可應用于病料組織中ORFV的定位檢測。表明成功建立了羊口瘡病毒單抗檢測牛睪丸上皮細胞和組織切片中ORFV的間接免疫熒光方法,有助于ORFV感染的實驗室診斷及其在感染細胞中的定位和動態(tài)分布研究。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 病毒、細胞株和組織
        1.1.2 主要試劑與儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細胞中ORFV的間接免疫熒光檢測
            1.2.1.1 牛睪丸上皮細胞的傳代培養(yǎng)
            1.2.1.2 羊口瘡病毒TCID50測定
            1.2.1.3 間接免疫熒光試驗
            1.2.1.4 ORFV接種滴度的確定
            1.2.1.5 熒光素標記羊抗小鼠二抗工作濃度的確定
        1.2.2 組織中ORFV的間接免疫熒光檢測
            1.2.2.1 組織冰凍切片制備
            1.2.2.2 免疫熒光染色
2 結(jié)果
    2.1 羊口瘡病毒TCID50測定
    2.2 ORFV接種滴度的優(yōu)化結(jié)果
    2.3 熒光素標記羊抗小鼠二抗工作濃度確定
    2.4 組織中ORFV的間接免疫熒光檢測
3 討論



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