為了探究感染朊病毒后含纈酪肽蛋白(valosin-containing protein,VCP)的變化情況及其對內質網相關蛋白降解(endoplasmic reticulum-associated degradation,ERAD)信號通路的影響,試驗采用細胞免疫熒光和實時熒光定量PCR等方法分析朊病毒感染的細胞系中VCP及其基因表達情況;Western-blot方法檢測朊病毒感染的細胞、小鼠腦組織中VCP含量變化,白藜蘆醇動態(tài)清除朊蛋白(prion protein,PrP)的SMB-S15細胞、PrP重組質粒pcDNA3.1(+)-Cyto-PrP瞬時轉染的293T細胞、蛋白酶體抑制劑MG-132處理的SMB-S15細胞中VCP的表達情況,以及朊病毒感染的細胞系中ERAD信號通路關鍵因子的表達水平。結果表明:與對照組相比,在朊病毒感染的細胞中VCP及基因表達水平差異不顯著(P>0.05);在終末期小鼠腦組織中VCP表達水平差異不顯著(P>0.05);經動態(tài)清除PrP、細胞內聚集PrP以及MG-132處理后,VCP表達水平均差異不顯著(P>0.05);在朊病毒感染細胞...

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【文章目錄】：
1 材料
    1.1 動物腦組織及細胞系
    1.2 質粒
    1.3 主要試劑
    1.4 主要儀器
2 方法
    2.1 朊病毒感染細胞中VCP分布及表達量檢測
    2.2 朊病毒感染細胞中VCP基因表達水平檢測
    2.3 感染朊病毒后VCP與ERAD信號通路關鍵因子檢測
        2.3.1 朊病毒感染細胞及腦組織中VCP含量檢測
        2.3.2 朊病毒與VCP相互作用分析
        2.3.3 蛋白酶體異常對泛素和VCP含量的影響
        2.3.4 朊病毒感染細胞中ERAD信號通路關鍵因子含量檢測
    2.4 數據的統(tǒng)計分析
3 結果與分析
    3.1 朊病毒感染細胞中VCP分布及表達量檢測
    3.2 朊病毒感染細胞中VCP基因表達水平檢測
    3.3 感染朊病毒后VCP與ERAD信號通路關鍵因子檢測
        3.3.1 朊病毒感染細胞及腦組織中VCP含量檢測
        3.3.2 朊病毒與VCP相互作用分析
        3.3.3 蛋白酶體異常對泛素和VCP含量的影響
        3.3.4 朊病毒感染細胞中ERAD信號通路關鍵因子含量檢測
4 討論
5 結論



本文編號：3744200