樹突狀細胞(Dendritic cells,DCs)是一種具有強大抗原提呈功能的免疫細胞,可促進T細胞和B細胞增殖分化,能夠啟動適應(yīng)性免疫應(yīng)答,具有調(diào)節(jié)炎癥性免疫反應(yīng)和免疫耐受的作用。DCs可以通過與腸道中的益生菌如乳酸桿菌作用調(diào)節(jié)機體黏膜免疫反應(yīng)。約氏乳酸桿菌(Lactobacillus johnsonii,L.johnsonii)作為腸道中的益生菌能夠調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng),在維持宿主腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)、調(diào)節(jié)腸道內(nèi)共生菌群的平衡和保持機體健康方面發(fā)揮著重要作用。分離于仔豬體內(nèi)的約氏乳酸桿菌常被用于飼料添加劑,具有維持腸道菌群平衡,刺激黏膜免疫系統(tǒng)發(fā)育,促進營養(yǎng)吸收提高造血功能的益生作用;由于其安全性和可靠性,還可作為口服疫苗中遞送抗原的理想傳送載體。因此研究約氏乳酸桿菌對樹突狀細胞免疫功能的影響,對揭示乳酸菌對腸道黏膜免疫激活作用的機制具有重要意義。本實驗通過采集5-8周齡仔豬外周血,利用Histopaque-1077淋巴細胞分離液分離出外周血單個核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs),再加入豬CD172a-PE單克隆抗體對單核細胞進行標記...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 樹突狀細胞
        1.1.1 樹突狀細胞的分類與分布
        1.1.2 樹突狀細胞與腸道黏膜免疫系統(tǒng)
    1.2 乳酸桿菌
        1.2.1 乳酸桿菌的益生作用
        1.2.2 乳酸桿菌的免疫調(diào)節(jié)作用
    1.3 乳酸桿菌對樹突狀細胞的影響
    1.4 乳酸桿菌作為重組疫苗載體研究進展
    1.5 約氏乳酸桿菌研究進展
    1.6 研究目的與意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌種
        2.1.2 細胞
        2.1.3 實驗動物
        2.1.4 培養(yǎng)基及主要試劑
        2.1.5 引物
        2.1.6 主要溶液配制
        2.1.7 主要儀器與設(shè)備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 豬外周血單核源樹突狀細胞(MoDCs)的分離培養(yǎng)
        2.2.2 約氏乳酸桿菌生物學(xué)特性分析
        2.2.3 約氏乳酸桿菌的培養(yǎng)及其滅活菌體和上清液制備
        2.2.4 表達ps420 蛋白的重組約氏乳酸桿菌的構(gòu)建及表達鑒定
        2.2.5 表達ps420 蛋白的重組大腸桿菌構(gòu)建,表達鑒定及蛋白純化
        2.2.6 約氏乳酸桿菌對豬樹突狀細胞免疫功能的影響
    2.3 統(tǒng)計學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 樹突狀細胞的形態(tài)學(xué)觀察
    3.2 樹突狀細胞純度檢測
    3.3 約氏乳酸桿菌生物學(xué)特性測定結(jié)果
        3.3.1 生長曲線
        3.3.2 約氏乳酸桿菌體外黏附性實驗結(jié)果
        3.3.3 約氏乳酸桿菌上清液抑菌實驗結(jié)果
        3.3.4 約氏乳酸桿菌藥敏實驗
    3.4 表達ps420 蛋白的重組約氏乳酸桿菌的構(gòu)建及表達鑒定結(jié)果
        3.4.1 表達ps420 蛋白的重組約氏乳酸桿菌的PCR鑒定
        3.4.2 Western blot鑒定重組約氏乳酸桿菌表達ps420 蛋白
    3.5 表達ps420 蛋白的重組大腸桿菌構(gòu)建及鑒定
        3.5.1 重組大腸桿菌表達載體pET-28a-ps420 的鑒定
    3.6 重組大腸桿菌表達ps420 蛋白的鑒定及蛋白純化
        3.6.1 SDS-PAGE鑒定
        3.6.2 目的蛋白純化及Western blot鑒定
    3.7 約氏乳酸桿菌對豬單核源樹突狀細胞免疫功能的影響
        3.7.1 樹突狀細胞表面標志檢測
        3.7.2 約氏乳酸桿菌對樹突狀細胞的黏附作用
        3.7.3 qRT-PCR檢測Toll樣受體分子mRNA表達
        3.7.4 細胞因子檢測
        3.7.5 CD4⁺T 細胞分離與純度檢測
        3.7.6 CD4⁺T 細胞增殖及相關(guān)細胞因子檢測
4 討論
    4.1 豬源約氏乳酸桿菌的益生作用
    4.2 豬單核源樹突狀細胞的分離及誘導(dǎo)培養(yǎng)
    4.3 約氏乳酸桿菌對MoDCs免疫功能的影響
    4.4 表達ps420 蛋白重組約氏乳酸桿菌對MoDCs免疫功能的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文



本文編號：3743577