目的:本試驗以研究綿羊支原體肺炎的抗病分子機制為目的,通過生物信息學(xué)的方法篩選,以期得到與MBL抗綿羊支原體肺炎相關(guān)的差異microRNA(miRNA)及基因,確定靶基因的生物學(xué)功能,并在細(xì)胞水平上進(jìn)行驗證,深入研究其在綿羊支原體肺炎中的調(diào)控機制,為豐富抗支原體肺炎的分子機制奠定基礎(chǔ)。方法:(1)miRNA在MBL抗綿羊支原體肺炎中可能起到關(guān)鍵作用,利用生物信息學(xué)方法聯(lián)合分析本課題組前期研究建立的高通量測序數(shù)據(jù)庫和轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)庫,篩選差異表達(dá)的miRNA及基因,TargetScan等軟件預(yù)測差異表達(dá)miRNA的靶基因。(2)分別構(gòu)建含有靶基因TRAF6 3’-UTR區(qū)的野生型和突變型的報告基因,利用Dual-Luciferase?Reporter Assay System驗證miR-509-5p對靶基因TRAF6的靶向調(diào)控作用。(3)呼吸道黏膜上皮是綿羊支原體肺炎的關(guān)鍵宿主,通過原代培養(yǎng)綿羊呼吸道黏膜上皮細(xì)胞,將miR-509-5p mimic、miR-509-5p mimic NC、miR-509-5p inhibitor以及miR-509-5p inhibitor NC轉(zhuǎn)染至該細(xì)...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
課題來源
摘要
Abstract
主要縮寫詞
第一章 緒論
    1 論文研究的目的與意義
    2 國內(nèi)外研究進(jìn)展
        2.1 綿羊支原體肺炎
        2.2 甘露聚糖結(jié)合凝集素
        2.3 微小RNA
        2.4 免疫調(diào)控通路
    3 研究內(nèi)容與技術(shù)路線
    4 技術(shù)路線
第二章 試驗研究
    試驗一mi RNA-mRNA聯(lián)合分析篩選MBL抗綿羊支原體肺炎的差異基因
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 差異表達(dá)miRNA分析
            3.2 qRT-PCR驗證
            3.3 靶基因預(yù)測
            3.4 轉(zhuǎn)錄組測序數(shù)據(jù)庫篩選分析差異表達(dá)基因
            3.5 差異miRNA靶基因富集分析
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗二雙熒光素酶報告系統(tǒng)鑒定oar-miR-509-5p對 TRAF6 基因的靶向調(diào)控
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 oar-miR-509-5p的靶基因預(yù)測
            3.2 psiCHECKTM-2 野生型和突變型載體構(gòu)建與鑒定
            3.3 293T細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)染
            3.4 oar-miR-509-5p對 TRAF6 表達(dá)的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗三miR-509-5p對呼吸道黏膜上皮細(xì)胞及NF-κB通路中相關(guān)基因影響的研究
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 綿羊呼吸道黏膜上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.2 呼吸道黏膜上皮細(xì)胞的免疫組化染色
            3.3 miR-509-5p對 NF-κB通路中相關(guān)基因的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗四miR-509-5p在 MO感染呼吸道黏膜上皮細(xì)胞NF-κB信號通路中的作用
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 實驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 測序結(jié)果SNP分析
            3.2 PI染色法檢測細(xì)胞死亡率
            3.3 NF-κB通路中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1β細(xì)胞因子標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
            3.4 細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IL-12、TNF-α、IL-6、IL-1βELISA檢測結(jié)果
            3.5 NF-κB通路中TRAF6 等基因?qū)崟r熒光定量結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
第三章 結(jié)論
第四章 論文創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
致謝
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本文編號：3739855