試驗旨在分離鑒定犬臍帶間充質干細胞分泌的外泌體（UC-MSC-Exo）,并研究犬UC-MSC-Exo來源miRNA的表達情況及其對血管內皮細胞（VEC）增殖的影響。采用超高速離心法從犬臍帶間充質干細胞培養(yǎng)上清中分離外泌體,采用Western blotting、透射電鏡和納米顆粒跟蹤分析法（NTA）進行鑒定。通過對犬UC-MSC-Exo中的miRNA進行測序,篩選出2個目標miRNA（cfa-miR-34a和cfa-miR-143）并合成相應的mimic和inhibitor,轉染犬VEC;采用熒光顯微鏡和實時熒光定量PCR法檢測mimic和inhibitor轉染情況及其轉染效率;CCK-8法檢測轉染mimic和inhibitor對犬VEC增殖能力的影響,并對其靶基因進行預測。結果顯示,犬UC-MSC-Exo表達特異性的外泌體表面蛋白CD9、CD63和CD81,粒徑集中在100～200 nm,電鏡檢測成典型的杯狀。免疫熒光結果表明,miRNA mimic和inhibitor均已轉染進細胞內,并且聚集于細胞質中;實時熒光定量PCR結果表明,轉染cfa-miR-34a mimic和cfa-mi... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 犬UC-MSC-Exo的分離
        1.2.2 犬UC-MSC-Exo的鑒定
        1.2.3 犬UC-MSC-Exo miRNA測序
        1.2.4 目標miRNA篩選
        1.2.5 VEC的分離培養(yǎng)
        1.2.6 熒光顯微鏡觀察mimic和inhibitor轉染情況
        1.2.7 實時熒光定量PCR法檢測mimic和inhibitor轉染效率
        1.2.8 CCK-8法檢測細胞增殖情況
        1.2.9 cfa-miR-34a和cfa-miR-143靶基因預測
2 結 果
    2.1 外泌體的鑒定結果
    2.2 外泌體miRNA測序結果
    2.3 miRNAs轉染效果檢測
    2.4 miRNAs對VEC增殖影響
    2.5 cfa-miR-34a和cfa-miR-143靶基因預測
3 討 論
4 結 論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]犬臍帶間充質干細胞來源外泌體對血管內皮細胞增殖、遷移和凋亡的調控作用[J]. 詹小舒,羅惠娜,羅冬章,陳勝鋒,王丙云,白銀山,陳志勝,劉璨穎,計慧琴.  中國組織工程研究. 2019(29)
[2]外泌體的功能及其在臨床應用中的研究進展[J]. 楊金鑫,王海軍,趙永坤,裴志花,孫明潔,王開,胡桂學.  中國畜牧獸醫(yī). 2018(12)
[3]犬臍帶間充質干細胞來源外泌體修復皮膚創(chuàng)傷[J]. 詹小舒,羅冬章,王丙云,盧瑜,冼偉杭,藍奕琦,郭建波,羅惠娜,白銀山,計慧琴,陳勝鋒,陳志勝,劉璨穎.  中國組織工程研究. 2018(25)
[4]骨髓間充質干細胞移植修復皮膚創(chuàng)傷[J]. 張貝瑩,羅冬章,麥海濤,陳祥浪,郭彥,王丙云,陳勝鋒,陳志勝.  中國組織工程研究. 2017(29)



本文編號：3731590