目的:本試驗以研究哈薩克羊季節(jié)性發(fā)情的調(diào)控機制為目的,通過生物信息學(xué)的方法篩選,以期得到與非繁殖季節(jié)哈薩克羊卵巢發(fā)育相關(guān)的差異microRNA及基因,研究靶基因的生物學(xué)功能,并在細(xì)胞水平上進(jìn)行驗證,深入探討其在非繁殖季節(jié)哈薩克羊的卵巢發(fā)育的調(diào)控機制,為豐富綿羊季節(jié)性發(fā)情的分子機制奠定基礎(chǔ)。方法:（1）本課題組前期建立了以非繁殖季節(jié)乏情綿羊（AN）為對照組,以非繁殖季節(jié)發(fā)情綿羊（EN）為實驗組的卵巢（O）組織microRNA文庫和mRNA文庫。通過生物信息學(xué)的方法分析miRNA文庫數(shù)據(jù)篩選得到差異性表達(dá)的miRNA,預(yù)測其靶標(biāo)基因;將預(yù)測結(jié)果與mRNA文庫進(jìn)行深度挖掘聯(lián)合分析篩選獲得差異表達(dá)的靶標(biāo)基因。（2）構(gòu)建MAPK8基因野生型和突變型雙熒光素酶載體,驗證miR-200c對靶基因MAPK8的靶向調(diào)控作用。（3）在綿羊卵巢顆粒細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-200c mimics和miR-200c mimics inhibition,用實時熒光定量PCR檢測靶基因MAPK8和部分差異表達(dá)的發(fā)情相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平變化。（4）在哈薩克羊卵巢顆粒細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-200c mimics、miR-20... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 緒論
    1 論文研究的目的與意義
    2 文獻(xiàn)綜述
        2.1 綿羊發(fā)情相關(guān)研究進(jìn)展
        2.2 MicroRNAs的研究進(jìn)展
    3 研究內(nèi)容與技術(shù)路線
        3.1 篩選非繁殖季節(jié)不同營養(yǎng)水平下的哈薩克羊卵巢中的差異表達(dá)基因
        3.2 差異性表達(dá)miRNA-mRNA靶標(biāo)關(guān)系驗證
        3.3 細(xì)胞水平上靶標(biāo)基因?qū)d羊繁殖調(diào)控作用的功能驗證
第二章 試驗研究
    試驗一 生物信息學(xué)篩選哈薩克羊卵巢中差異表達(dá)的microRNAs-mRNA
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 試驗材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 差異表達(dá)miRNA-mRNA分析
            3.2 實時熒光定量驗證
            3.3 靶基因預(yù)測
            3.4 差異miRNA靶基因富集分析
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗二 雙熒光素酶報告系統(tǒng)鑒定oar-miR-200c介導(dǎo)MAPK8 基因的靶向調(diào)控
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 oar-miR-200c的靶基因
            3.2 野生型和突變型psiCHECKTM-2 載體構(gòu)建與鑒定
            3.3 HEK-293T細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)染
            3.4 oar-miR-200c對 MAPK8 表達(dá)的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗三 綿羊卵巢顆粒細(xì)胞中miR-200c對 MAPK8 基因的表達(dá)調(diào)控
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
            3.1 卵巢顆粒細(xì)胞的培養(yǎng)
            3.2 卵巢顆粒細(xì)胞的免疫組化染色
            3.3 miR-200c對MAPK8 等發(fā)情相關(guān)基因的影響
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗四 綿羊卵巢顆粒細(xì)胞中miR-200c介導(dǎo)MAPK8對E2、P4 的影響
        1 引言
        2 材料與方法
            2.1 材料
            2.2 試驗方法
        3 試驗結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
第三章 全文結(jié)論
第四章 論文創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表



本文編號：3731471