原核表達(dá)牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）NS3蛋白,并以此免疫動物制備多克隆抗體。對BVDV NS3蛋白的抗原決定簇氨基酸序列分析,構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a-NS3,轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）感受態(tài)細(xì)胞中,使用IPTG誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。選擇最優(yōu)誘導(dǎo)條件對目的蛋白進(jìn)行親和純化,目的蛋白主要以包涵體形式表達(dá),從而獲得NS3蛋白。使用NS3蛋白免疫新西蘭大白兔,制備兔抗NS3蛋白多克隆抗體,采用ELISA方法檢測多克隆抗體效價。結(jié)果顯示,成功表達(dá)并純化出BVDV NS3蛋白,制備的兔抗NS3蛋白多克隆抗體效價大于1∶128 000,為建立BVDV抗體/抗原檢測方法及疫苗的研究奠定了基礎(chǔ)。 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試劑
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)動物
        1.1.3 主要儀器
    1.2 方法
        1.2.1 NS3序列分析
        1.2.2 基因合成構(gòu)建及鑒定
        1.2.3 NS3蛋白的原核表達(dá)
        1.2.4 制備多克隆抗體及純化
        1.2.5 多克隆抗體鑒定
2 結(jié)果
    2.1 NS3抗原分析
    2.2 重組質(zhì)粒載體pET30a-NS3的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.3 NS3蛋白純化及特異性檢測
    2.4 抗NS3蛋白多克隆抗體的測定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃病毒NS2-3/NS3蛋白的結(jié)構(gòu)與功能[J]. 鄭杰,趙啟祖,趙耘,寧宜寶.  病毒學(xué)報. 2007(03)
[2]梅花鹿源BVDV NS2-3基因重要區(qū)的克隆與序列分析[J]. 溫鐵鋒,郜玉鋼,王樹志,杜銳.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2006(01)

碩士論文
[1]牛病毒性腹瀉病毒蛋白對其非編碼區(qū)的調(diào)節(jié)作用[D]. 宋現(xiàn)梅.山東師范大學(xué) 2018
[2]BVDV-2分離株XJ-04全基因組測序和抗BVDV單克隆抗體制備及初步應(yīng)用[D]. 林燕清.揚(yáng)州大學(xué) 2010



本文編號：3722946