威爾姆氏瘤基因1（Wilms tumour gene1, WT1）是第一個被發(fā)現(xiàn)與威爾姆氏瘤相關(guān)的功能失活的基因，并且在腎臟發(fā)育中起著十分重要的作用。WT1基因敲除小鼠無腎臟、生殖腺缺失以及視網(wǎng)膜畸形，因此，在發(fā)育過程中，WT1基因與腎臟及生殖腺細胞的存活及分化密切相關(guān)。目前對于WT1基因的研究大多數(shù)是關(guān)于人的各種腫瘤疾病以及小鼠的腎臟及睪丸發(fā)育方面的研究，而WT1基因在豬體內(nèi)表達及功能研究的相關(guān)報道較少。豬是我國最重要的肉用家畜，同時在解剖、生理和代謝等方面與人類十分接近，藥物代謝、器官大小和功能也基本相似，是人類異種器官移植的重要目標(biāo)動物和理想的人類疾病模型動物。 因此本實驗旨在分離培養(yǎng)原代豬胎兒成纖維細胞（PFF）以及豬腎成纖維細胞（PKF），檢測三種豬細胞中PFF、PKF及睪丸細胞（ST）中WT1基因的表達，以及WT1蛋白在這三種細胞中的分布情況，為WT1基因在腎臟和生殖腺中表達及功能的進一步研究奠定基礎(chǔ)。主要結(jié)果包括：（1）原代培養(yǎng)豬胎兒成纖維細胞（PFF）及豬腎成纖維細胞（PKF）；經(jīng)RT-PCR及熒光定量PCR檢測到WT1基因分別在PFF、PKF及ST細胞中表達；... 

【文章頁數(shù)】：126 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
內(nèi)容提要
中文摘要
ABSTRACT
英文縮寫詞表
前言
第一篇 文獻綜述
    第1章 威爾姆氏瘤基因1（Wilms tumor gene 1, WT1）概述
        1.1 WT1 基因概況
        1.2 WT1 基因與腫瘤形成
        1.3 小結(jié)
    第2章 WT1 基因在腎臟和性腺發(fā)育中的作用
        2.1 WT1 基因與腎臟發(fā)育
        2.2 WT1 基因與性腺發(fā)育
        2.3 與泌尿生殖相關(guān)的發(fā)育基因
        2.4 小結(jié)
第二篇 實驗研究
    第1章 威爾姆氏瘤基因1（WT1）在PFF、PKF及ST細胞中的表達情況分析
        1.1 材料與試劑
        1.2 實驗方法
        1.3 結(jié)果
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 pLV3-WT1 shRNA 慢病毒表達載體構(gòu)建及其對PKF細胞中WT1 基因下調(diào)表達的影響
        2.1 材料與試劑
        2.2 實驗方法
        2.3 實驗結(jié)果
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
    第3章 pLV3-WT1 shRNA 慢病毒表達載體對 ST 細胞中 WT1 基因下調(diào)表達的影響
        3.1 材料與試劑
        3.2 實驗方法
        3.3 實驗結(jié)果
        3.4 討論
        3.5 小結(jié)
    第4章 pIRES2-WT1-EGFP表達載體的構(gòu)建及其在ST 細胞中的穩(wěn)定表達
        4.1 材料與試劑
        4.2 實驗方法
        4.3 結(jié)果
        4.4 討論
        4.5 小結(jié)
    第5章 pLV3-WT1 shRNA慢病毒表達載體對 PFF細胞中WT1基因下調(diào)表達的影響
        5.1 材料與試劑
        5.2 實驗方法
        5.3 實驗結(jié)果
        5.4 討論
        5.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導(dǎo)師簡介
攻讀博士期間發(fā)表論文
致謝



本文編號：3720656