本文關(guān)鍵詞：森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鑒別方法的建立及線粒體基因組序列分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：蜱是一類以吸食動物血液為生的體外寄生蟲,蟲體主要寄生于家畜和野生動物體表,也侵襲人類。蜱可以攜帶及傳播多種病原體,包括細菌、病毒和寄生蟲等,并且能通過直接叮咬造成蜱癱、中毒和過敏,不僅給畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失,還可嚴重影響人類健康,威脅公共衛(wèi)生安全。森林革蜱(Dermacentor silvarum)和草原革蜱(Dermacentor nuttalli)是中國北方常見的兩個蜱種,形態(tài)相似,通過形態(tài)學(xué)方法進行準確鑒定比較困難。因此,本研究第一部分內(nèi)容是建立一種森林革蜱和草原革蜱的分子鑒定方法,即以核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列為基礎(chǔ)建立森林革蜱和草原革蜱的PCR-RFLP方法。通過提取森林革蜱和草原革蜱的基因組DNA,設(shè)計引物,PCR擴增和測序,最終獲得準確的森林革蜱和草原革蜱的ITS2序列,并運用DNAStar軟件對所得序列的限制性片段長度多態(tài)性進行分析。研究發(fā)現(xiàn),森林革蜱和草原革蜱ITS2的PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)限制性內(nèi)切酶Spe I酶切后所得片段明顯不同,森林革蜱ITS2 PCR產(chǎn)物不能被切開而草原革蜱則被切成兩段�？梢�,運用PCR-RFLP方法可成功鑒別森林革蜱和草原革蜱。目前關(guān)于革蜱的研究主要局限于形態(tài)學(xué)、流行病學(xué)、綜合防治及蜱傳疾病等方面,而關(guān)于線粒體基因組方面的研究很少。因此,本實驗第二部分內(nèi)容是擴增森林革蜱線粒體的全基因組序列并對其結(jié)構(gòu)特點進行分析,探討革蜱屬的進化分類關(guān)系。結(jié)果顯示,森林革蜱線粒體基因組全長為14945 bp,由13個蛋白質(zhì)編碼基因、2個非編碼區(qū)、22個t RNA和2個核糖體RNA構(gòu)成,各基因排列順序與后溝類硬蜱相似。森林革蜱整個線粒體基因組核苷酸組成為A=38.89%,T=39.89%,G=8.94%,C=12.29%,A+T含量為78.78%。在森林革蜱的線粒體基因組t RNA-Glu和nad1之間存在一個插入基因,長度為127bp,含有3個重復(fù)序列“similar to nad1”。運用BI、ML和MP三種方法分別以森林革蜱線粒體基因組的13個蛋白質(zhì)編碼基因為標記構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種建樹方法所得結(jié)果一致或相似,即進化樹分為兩大分支,后溝類硬蜱和前溝類硬蜱各形成一個分支,森林革蜱位于后溝類硬蜱分支上。在后溝類這一分支中,革蜱屬、扇頭蜱屬和凹溝蜱屬均形成單一分支,而花蜱屬和血蜱屬形成復(fù)分支。革蜱屬與扇頭蜱屬親緣關(guān)系較其它蜱屬近。本研究首次建立了鑒別森林革蜱和草原革蜱的PCR-RFLP方法,為兩種革蜱的鑒別提供了參考;首次對森林革蜱線粒體的全基因組進行測序,并對其基因特征進行比較分析,豐富了蜱的線粒體基因組數(shù)據(jù),為進一步研究蜱分類及其進化關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：森林革蜱 草原革蜱 PCR-RFLP 線粒體基因組 進化分析
【學(xué)位授予單位】：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S852.746
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 第一章 文獻綜述10-32
• 1.1 草原革蜱和森林革蜱11-16
• 1.1.1 病原11
• 1.1.2 草原革蜱和森林革蜱的外部形態(tài)學(xué)特征11-13
• 1.1.3 生活史13
• 1.1.4 分類討論13-14
• 1.1.5 流行病學(xué)14
• 1.1.6 蜱及蜱傳病的癥狀及危害14-15
• 1.1.7 蜱及蜱傳病的防治15-16
• 1.2 蜱分子分類研究進展16-17
• 1.3 蜱線粒體基因組研究進展17-30
• 1.3.1 蜱線粒體基因組測序完成概況17-20
• 1.3.2 蜱線粒體基因組的一般特征20-29
• 1.3.3 線粒體基因組在蜱中的應(yīng)用29-30
• 1.4 研究的目的與意義30-32
• 第二章 森林革蜱與草原革蜱PCR-RFLP鑒別方法的建立32-42
• 2.1 材料與方法32-36
• 2.1.1 材料32-34
• 2.1.2 方法34-36
• 2.2 結(jié)果36-39
• 2.2.1 PCR擴增結(jié)果36
• 2.2.2 兩種革蜱ITS2測序結(jié)果分析36-37
• 2.2.3 PCR-RFLP結(jié)果37-39
• 2.3 討論39-42
• 第三章 森林革蜱線粒體全序列分析及系統(tǒng)發(fā)生研究42-70
• 3.1 材料與方法42-49
• 3.1.1 材料42-45
• 3.1.2 方法45-49
• 3.2 結(jié)果49-65
• 3.2.1 森林革蜱粒體基因組各段序列的PCR擴增及鑒定49-56
• 3.2.2 森林革蜱的線粒體全基因組序列分析56-61
• 3.2.3 序列分析61-64
• 3.2.4 進化分析64-65
• 3.3 討論65-70
• 3.3.1 森林革蜱的線粒體基因組的結(jié)構(gòu)特征65-66
• 3.3.2 蛋白質(zhì)編碼基因66-67
• 3.3.3 核糖體RNA和t RNA基因67-68
• 3.3.4 非編碼區(qū)68
• 3.3.5 進化分析68-70
• 第四章 結(jié)論70-72
• 附錄72-78
• 參考文獻78-90
• 致謝90-92
• 個人簡歷92

【參考文獻】

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  本文關(guān)鍵詞：森林革蜱和草原革蜱PCR-RFLP鑒別方法的建立及線粒體基因組序列分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：371868