干擾素有著抗病毒、抗細胞增殖、免疫調節(jié)等多種極具醫(yī)療價值的功效。而體內半衰期短的缺點卻嚴重限制著它的臨床應用。人醫(yī)臨床上常用人血清白蛋白與干擾素的融合蛋白方式來延長干擾素半衰期,而動物臨床上卻沒有這種融合蛋白長效干擾素開發(fā)應用的報道。同時現有的動物干擾素制品大都采用原核表達方式表達生產,其產品在活性和成本方面都不理想。而酵母表達系統是一種真核表達系統,其所表達的蛋白產物修飾合理,活性高。畢赤酵母的分泌表達會把目的蛋白分泌到培養(yǎng)液上清中,而其它雜質蛋白很少,更加有利于目的蛋白的分離純化,有利于降低目的蛋白的生產成本。所以本實驗用畢赤酵母表達系統分泌表達了犬血清白蛋白與犬alpha干擾素的融合蛋白,以此來探索應用血清白蛋白融合蛋白技術來制備犬長效干擾素的可行性。 實驗共分四個主體部分,首先是表達質粒的構建,用反轉錄PCR法從犬組織器官中擴增出犬血清白蛋白cDNA,再對犬血清白蛋白cDNA進行修飾,首先去掉終止密碼子的同時在5’端加入EcoR Ⅰ酶切位點,在3’端加入柔性Linker堿基鏈和BamH Ⅰ酶切位點,再對改造后的cDNA進行點突變,以此來消除不利于質粒構建的兩個Bg1Ⅱ酶... 

【文章頁數】：109 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
前言
第一篇 文獻綜述
    第一章 干擾素的研究現狀
        1.1 干擾素的分類
        1.2 干擾素的作用方式
        1.3 動物干擾素
        1.4 干擾素作用的影響因素
    第二章 血清白蛋白作為運輸載體的研究進展
    第三章 蛋白表達系統
        3.1 大腸桿菌表達系統
        3.2 昆蟲細胞桿狀病毒表達系統
        3.3 哺乳動物細胞表達系統
        3.4 酵母表達系統
    第四章 實驗內容及意義
第二篇 研究內容
    第一章 融合蛋白畢赤酵母表達質粒的構建
        1.1 引言
        1.2 材料和方法
        1.3 結果
        1.4 討論
        1.5 小結
    第二章 表達犬長效干擾素融合蛋白重組畢赤酵母菌的構建
        2.1 引言
        2.2 材料和方法
        2.3 結果
        2.4 討論
        2.5 小結
    第三章 犬長效干擾素融合蛋白的誘導表達及純化
        3.1 引言
        3.2 材料和方法
        3.3 結果
        3.4 討論
        3.5 小結
    第四章 犬長效干擾素融合蛋白的生物學活性檢測
        4.1 引言
        4.2 材料和方法
        4.3 結果
        4.4 討論
        4.5 小結
結論
參考文獻
附錄
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3716529