本研究應(yīng)用以減毒沙門氏菌為載體的新型生長抑素基因疫苗,從工程菌保存和免疫兩方面開展研究：第一部分通過比較幾種保存方法的效果,旨在開發(fā)提高DNA疫苗保存效果的方法,第二部分從免疫劑量方面探討新型生長抑素DNA疫苗噴霧免疫泌乳后期奶牛的效果和安全性,旨在為生長抑素基因疫苗應(yīng)用于奶牛提供試驗(yàn)依據(jù)。1工程菌的保存方法將發(fā)酵離心后的600mLpVGS/2SS-asd初始濃度為8.43×1010cfu/mL的菌液按照低溫液態(tài)保存、低溫干燥保存和冷凍干燥保存,菌液分成三個(gè)等份,在不同時(shí)期使用活菌平板計(jì)數(shù)法測定細(xì)菌存活率。其中低溫液態(tài)保存探討了pH（6.8、7.0、7.4、7.8）、保護(hù)劑（蔗糖、葡萄糖、海藻糖）及濃度（3%、5%、10%）、菌液濃度（8.43×1010cfu/mL、 8.43×109cfu/mL、8.43 X 108cfu/mL）等條件下的保存效果；低溫干燥保存探討了100g麩皮中加入不同菌液量（1mL、2mL、L、8mL）的保存效果；冷凍干燥保存探討了不同冷凍保護(hù)劑（A、B、C）和初始菌液濃度（8.43 X 1010cfu/mL、8.43 X 109cfu/mL、8.43×108c... 

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
第一篇 文獻(xiàn)綜述
    第一章 工程菌保存方法研究進(jìn)展
        1 菌種保存主要方法
            1.1 傳代培養(yǎng)保存法
                1.1.1 斜面?zhèn)鞔囵B(yǎng)保存
                1.1.2 高層半固體培養(yǎng)保存
                1.1.3 液體石蠟保存法
            1.2 載體保存法
                1.2.1 砂土保存法
                1.2.2 濾紙法
            1.3 冷凍保存法
                1.3.1 甘油冷凍保存法
                1.3.2 低溫冷凍法
            1.4 液氮超低溫保存法
            1.5 冷凍干燥保存法
                1.5.1 冷凍保護(hù)劑對保存效果的影響
                1.5.2 凍干曲線對保存效果的影響
        2 菌種保存其他方法
            2.1 細(xì)菌濕種牛奶凍存法
            2.2 懸液保存法
            2.3 脫纖維羊血冷凍保存法
    第二章 生長抑素基因免疫研究進(jìn)展
        1 生長抑素基因疫苗的構(gòu)建和安全性評價(jià)
            1.1 生長抑素基因疫苗的構(gòu)建
            1.2 生長抑素基因疫苗的安全性評價(jià)
                1.2.1 基因整合
                1.2.2 抗DNA抗體
                1.2.3 免疫耐受
                1.2.4 免疫佐劑
                1.2.5 其它問題
        2 生長抑素基因疫苗的接種方式和免疫途徑研究進(jìn)展
            2.1 注射免疫
                2.1.1 肌肉注射
                2.1.2 皮內(nèi)注射
                2.1.3 靜脈注射和腹腔注射
            2.2 粘膜免疫
            2.3 基因槍
            2.4 電穿孔
        3 生長抑素基因疫苗的免疫效果研究進(jìn)展
            3.1 生長抑素基因疫苗促進(jìn)動物生長
            3.2 生長抑素基因疫苗促進(jìn)動物泌乳
        4 生長抑素基因疫苗存在的問題和發(fā)展前景
            4.1 生長抑素基因疫苗存在的問題
            4.2 生長抑素基因疫苗存在的發(fā)展前景
        5 研究目的及意義
第二篇 試驗(yàn)研究
    第三章 工程菌保存方法研究
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)菌株
            2.2 溶液配制
            2.3 主要試劑
            2.4 主要儀器設(shè)備
            2.5 質(zhì)粒小提鑒定
            2.6 細(xì)菌發(fā)酵與濃縮
            2.7 細(xì)菌平板計(jì)數(shù)
            2.8 不同菌種保存方法
            2.9 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 不同pH值的細(xì)菌存活率
            3.2 不同保護(hù)劑及濃度的細(xì)菌存活率
            3.3 不同初始濃度的細(xì)菌存活率
            3.4 低溫干燥保存的細(xì)菌存活率
            3.5 菌液凍干后的形狀
            3.6 不同冷凍保護(hù)劑冷凍干燥保存的細(xì)菌存活率
            3.7 三種不同保存方法的比較
        4 討論
    第四章 生長抑素基因疫苗免疫泌乳后期奶牛的研究
        1 前言
        2 材料與方法
            2.1 基因疫苗和試驗(yàn)動物
            2.2 主要試劑
            2.3 主要溶液配制
            2.4 疫苗制備
            2.5 動物免疫
            2.6 安全性觀察
            2.7 樣采集
            2.8 抗體效價(jià)檢測
            2.9 產(chǎn)奶量和DHI檢測
            2.10 激素測定
            2.11 統(tǒng)計(jì)分析
        3 結(jié)果與分析
            3.1 雙酶切鑒定結(jié)果
            3.2 安全性觀察
            3.3 抗體效價(jià)和抗體陽性牛比例
            3.4 奶牛日常奶量分析
            3.5 奶牛免疫后不同時(shí)期DHI結(jié)果分析
            3.6 奶牛免疫12周后GH、PRL、SS結(jié)果分析
        4 討論
全文結(jié)論
創(chuàng)新與不足
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]兩種不同的細(xì)菌菌種保存方法比較[J]. 干迪郁,任利珍,朱立軍.  中國鄉(xiāng)村醫(yī)藥. 2010(10)
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[10]粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子基因佐劑對DNA疫苗的免疫調(diào)節(jié)作用[J]. 舒鄧群,茆達(dá)干,吳志敏,楊利國.  畜牧與獸醫(yī). 2007(03)

博士論文
[1]奶牛產(chǎn)后生殖機(jī)能恢復(fù)與生長抑素基因免疫[D]. 張劍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010

碩士論文
[1]pGM-CSF/SS基因免疫對雌鼠生長和繁殖的影響及其安全性研究[D]. 白莉雅.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[2]激生1號在草食動物生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用研究[D]. 肖慎華.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005



本文編號：3712072