本試驗(yàn)旨在進(jìn)一步全面研究綿羊肺腺瘤病毒（JSRV）囊膜蛋白ENV的功能。使用本試驗(yàn)室已構(gòu)建好的真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1（+）/exJSRV-env轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞,并將此NIH3T3細(xì)胞接種到裸鼠體內(nèi);重組質(zhì)粒經(jīng)尾靜脈注射到幼齡BALB/c小鼠體內(nèi)。結(jié)果顯示,真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1（+）/exJSRV-env引起NIH3T3細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)染細(xì)胞接觸抑制性消失,并形成大量的轉(zhuǎn)化灶;pcDNA3.1（+）/exJSRV-env轉(zhuǎn)染的NIH3T3細(xì)胞接種裸鼠使裸鼠致瘤,即引起NIH3T3細(xì)胞發(fā)生癌變。JSRVenv基因在小鼠體內(nèi)表達(dá),肝臟細(xì)胞出現(xiàn)大面積彌散性壞死,脾臟白髓嚴(yán)重壞死,心肌細(xì)胞明顯顆粒樣變性,肺間質(zhì)細(xì)胞增生,腎小管上皮細(xì)胞輕度顆粒樣變性。結(jié)果表明,綿羊肺腺瘤病毒囊膜蛋白可以引起鼠NIH3T3細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化和癌變,使小鼠各臟器出現(xiàn)不同程度的病變。本試驗(yàn)為進(jìn)一步探索JSRV ENV的致瘤機(jī)制奠定基礎(chǔ)。 

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及處理
        1.1.2主要試劑
    1.2 真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/exJSRV-env的鑒定
    1.3 細(xì)胞轉(zhuǎn)化和鑒定
    1.4裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn)
    1.5 pcDNA3.1(+)/exJSRV-env在小鼠體內(nèi)表達(dá)
    1.6 RT-PCR檢測env基因mRNA的表達(dá)
    1.7 病理組織學(xué)H.E染色
2 結(jié)果
    2.1 真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)/JSRV-env的鑒定
    2.2 pcDNA3.1(+)/exJSRV-env轉(zhuǎn)染NIH3T3細(xì)胞
        2.2.1 pcDNA3.1(+)/exJSRV-env轉(zhuǎn)染NIH-3T3細(xì)胞后目的基因的檢測
        2.2.2 JSRV-env基因引起NIH3T3細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化
    2.3 JSRV-env基因引起NIH3T3細(xì)胞發(fā)生癌變
    2.4 JSRV-ENV蛋白在小鼠體內(nèi)不同臟器中的mRNA的表達(dá)檢測
    2.5 JSRV-ENV蛋白引起小鼠體內(nèi)不同臟器發(fā)生變化的檢測
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]enJSRV囊膜蛋白及其受體的瞬時表達(dá)與綿羊絨毛膜滋養(yǎng)層細(xì)胞融合的誘導(dǎo)研究[J]. 張宇飛,石晶,劉淑英.  畜牧獸醫(yī)學(xué)報. 2015(11)
[2]綿羊肺腺瘤病毒pEGFP-C1/exJSRV-env構(gòu)建及引起NIH3T3細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的研究[J]. 張宇飛,劉月,王專家,孫曉林,劉淑英.  病毒學(xué)報. 2014(03)
[3]綿羊肺腺瘤病毒SYBR GreenⅠ實(shí)時熒光定量PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 王金良,于新友,沈志強(qiáng),孫翠平,唐娜.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2013(11)
[4]pcDNA3.1（+）/exJSRV-env重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其瞬時轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞[J]. 張宇飛,劉月,張亞坤,孫曉林,劉淑英.  畜牧與獸醫(yī). 2012(S1)



本文編號：3711791