近些年來(lái),隨著體外受精（IVF）技術(shù)的出現(xiàn),在體外獲得胚胎的技術(shù)取得了實(shí)質(zhì)性的發(fā)展。體外受精技術(shù)不僅應(yīng)用于畜牧生產(chǎn),同時(shí),也成為研究其他胚胎生物技術(shù),如克隆、轉(zhuǎn)基因、胚胎干細(xì)胞分離培養(yǎng)和性別控制等的重要輔助手段。然而,在豬IVF的過(guò)程中,多精受精現(xiàn)象是一個(gè)始終無(wú)法解決的問(wèn)題。所以,盡量地降低多精受精的比率,對(duì)于獲得更多高質(zhì)量的IVF胚胎來(lái)說(shuō)是相當(dāng)重要的。而其中,培養(yǎng)液的優(yōu)化是降低多精受精的比率的重要組成部分。 為了優(yōu)化豬體外受精技術(shù)體系,本試驗(yàn)探索了在豬IVF培養(yǎng)體系中,在幾個(gè)關(guān)鍵的時(shí)間點(diǎn)加入不同濃度的甲基-p-環(huán)化糊精（MBCD）,經(jīng)過(guò)體外受精以及胚胎培養(yǎng)后,來(lái)評(píng)估其胚胎的發(fā)育能力以及體外受精的效率,從而探索甲基-p-環(huán)化糊精（MBCD）對(duì)豬體外受精的效率以及度隨后的胚胎發(fā)育的影響。并通過(guò)CTC染色的方法來(lái)評(píng)估精子在含甲基-p-環(huán)化糊精（MBCD）的IVF體系中的獲能狀態(tài)。 在體外受精前48h、體外受精0h、4h和6h向受精液（modified Tris-buffered medium, mTBM）中添加不同濃度（0μmol/mL、0.5μmol/mL、1μmol/L... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 體外受精
    1.2 多精受精
        1.2.1 體內(nèi)阻止多精受精的方法
        1.2.2 體外影響多精受精的因素
        1.2.3 減少多精受精采取的措施
    1.3 精子獲能
        1.3.1 概述
        1.3.2 精子獲能的分析方法
        1.3.3 精子獲能的機(jī)制
    1.4 環(huán)化糊精
    1.5 研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 豬卵巢
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)主要器材
        2.1.4 主要試劑的配置
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 豬精子的準(zhǔn)備
        2.2.2 豬體外受精程序
        2.2.3 胚胎細(xì)胞核染色(Hoechst 33342染色法)
        2.2.4 金霉素?zé)晒鈾z測(cè)精子(Hoechst 33258-CTC聯(lián)合染色法)
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 MBCD對(duì)豬體外受精胚胎發(fā)育的影響
        3.1.1 IVT前48h向受精液中添加不同濃度MBCD對(duì)胚胎發(fā)育的影響
        3.1.2 IVF 0h向受精液中添加不同濃度MBCD對(duì)胚胎發(fā)育的影響
        3.1.3 IVF 4h后向受精液中添加不同濃度MBCD對(duì)胚胎發(fā)育的影響
        3.1.4 IVF 6h后向PZM-3中添加不同濃度MBCD對(duì)胚胎發(fā)育的影響
    3.2 MBCD對(duì)豬體外受精狀態(tài)的影響
        3.2.1 IVF前48h向受精液中添加不同濃度MBCD對(duì)豬受精狀態(tài)的影響
        3.2.2 IVF 0h向受精液中添加不同濃度MBCD對(duì)豬受精狀態(tài)的影響
        3.2.3 IVF 4h向受精液中添加不同濃度MBCD對(duì)豬受精狀態(tài)的影響
    3.3 MBCD對(duì)豬體外受精過(guò)程中精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.1 向受精液中添加0μmol/ml的MBCD對(duì)豬精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.2 向受精液中添加1μmol/ml的MBCD對(duì)豬精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.3 向受精液中添加5μmol/ml的MBCD對(duì)豬精子獲能狀態(tài)的影響
        3.3.4 向受精液中添加20μmol/ml的MBCD對(duì)豬精子獲能狀態(tài)的影響
4 討論
    4.1 MBCD在受精液中的毒性問(wèn)題
    4.2 MBCD在受精液中的降解問(wèn)題
    4.3 MBCD對(duì)于豬體外受精胚胎發(fā)育的影響
    4.4 MBCD對(duì)于豬體外受精效率的影響
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3706639