結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis, MTB）引起的一種人畜共患的慢性消耗性傳染病。該病是目前世界上單一致病菌感染導致病死率最高的疾病之一。近年來隨著人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）的廣泛流行以及多重耐藥菌株的出現(xiàn)使得結(jié)核病變的復雜和難以防控。 NF-κB （nuclear factor-KB）是廣泛存在于各種類型細胞中的一種轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控許多基因的轉(zhuǎn)錄,在免疫應答、炎癥反應和細胞凋亡中發(fā)揮重要作用。 MTB致病機制復雜,分泌蛋白、脂蛋白、跨膜蛋白等介導細菌與宿主的相互作用,與宿主接觸過程中能破壞宿主組織,引起一系列級聯(lián)反應,在MTB致病過程中起重要作用,并影響宿主免疫防御。MTB能通過調(diào)節(jié)NF-κB活性來調(diào)節(jié)細胞的壞死和凋亡,然而具體的機制不是很清楚。本研究以NF-κB信號轉(zhuǎn)導途徑為切入點,篩選調(diào)控NF-κB的MTB分泌蛋白、脂蛋白、膜蛋白,分析其調(diào)控NF-κB的信號轉(zhuǎn)導途徑以及生物學意義,從而為進一步闡明結(jié)核分枝桿菌的致病機制和免疫機理奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容如下： 1.... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語表
第1章 文獻綜述
    1.1 結(jié)核病簡介
    1.2 結(jié)核分枝桿菌分子生物學特征
    1.3 天然免疫簡介
    1.4 結(jié)核分枝桿菌與天然免疫
        1.4.1 Toll樣受體
        1.4.2 NOD2和NOD樣受體
        1.4.3 炎癥小體
        1.4.4 C型凝集素受體
        1.4.5 胱天蛋白酶募集域蛋白9
        1.4.6 維生素D
        1.4.7 Ⅰ型干擾素
        1.4.8 自然殺傷細胞
    1.5 NF-κB信號轉(zhuǎn)導途徑
        1.5.1 NF-κB及其相關(guān)分子
        1.5.2 NF-κB激活的分子機制
        1.5.3 NF-κB激活的上游信號轉(zhuǎn)導途徑
第2章 研究目的與意義
第3章 材料與方法
    3.1 試驗材料
        3.1.1 菌株與細胞
        3.1.2 質(zhì)粒與載體
        3.1.3 工具酶及主要試劑
        3.1.4 培養(yǎng)基和抗生素的其配制
        3.1.5 主要緩沖液和試劑及其配制
        3.1.6 主要實驗儀器及設備
        3.1.7 分子生物學分析軟件
    3.2 實驗方法
        3.2.1 候選目的蛋白基因的PCR擴增
        3.2.2 PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物回收與純化
        3.2.3 外源DNA片段與質(zhì)粒載體的連接反應
        3.2.4 大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備(氯化鈣法)
        3.2.5 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        3.2.6 質(zhì)粒的制備與鑒定
        3.2.7 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染(脂質(zhì)體介導轉(zhuǎn)染法)
        3.2.8 雙熒光素酶檢測實驗
        3.2.9 Western Blot樣品準備
第4章 結(jié)果與分析
    4.1 目的基因的選擇
    4.2 真核表達質(zhì)粒的構(gòu)建
    4.3 調(diào)控NF-κB活性的結(jié)核分枝桿菌蛋白的篩選
    4.4 MTB Rv2185c促進NF-κB活化的分子機制研究
        4.4.1 MTB Rv2185c促進NF-κB活化呈劑量依賴性和細胞特異性
        4.4.2 MTB Rv2185c促進NF-κB活化的重要區(qū)域的確定
        4.4.3 MTB Rv2185c促進p65磷酸化
    4.5 MTB Rv3763抑制TNF-α誘導的NF-κB活化的分子機制研究
        4.5.1 MTB Rv3763抑制TNF-α誘導的NF-κB活化呈劑量依賴性
        4.5.2 MTB Rv3763抑制TNF-α誘導的NF-κB活化的重要區(qū)域的確定
        4.5.3 MTB Rv3763蛋白抑制TNF-α誘導的p65磷酸化
第5章 討論與結(jié)論
    5.1 討論
        5.1.1 目的基因的選擇
        5.1.2 調(diào)控NF-κB活性的MTB蛋白篩選
        5.1.3 Rv2185c促進NF-κB活化的分子機制初步研究
        5.1.4 Rv3763抑制TNF-α誘導的NF-κB活化的分子機制初步研究
    5.2 結(jié)論
參考文獻
附錄1 PCR擴增引物及相應的酶切位點
附錄2 調(diào)控NF-κB活性的結(jié)核分枝桿菌蛋白初步篩選結(jié)果
附錄3 擴增MTB Rv2185c基因突變體的引物序列
附錄4 擴增MTB Rv3763基因突變體的引物序列
致謝



本文編號：3702423