糞腸球菌是人和動物體內(nèi)正常菌群的重要組成部分,隨著抗生素的持續(xù)大量使用,糞腸球菌的耐藥性普遍提高,是一種重要的條件致病菌,能引起人和動物感染性疾病的發(fā)生,威脅著人類健康和畜牧業(yè)的健康發(fā)展。如今,糞腸球菌感染動物造成腦膜炎的病例逐年增多,而糞腸球菌是如何穿越對多種物質(zhì)具有選擇透過性的血腦屏障而進(jìn)入腦部,并對腦組織造成損傷的機(jī)制卻鮮有報道。因此,本研究在前期工作基礎(chǔ)上,選擇從患有腦膜炎的羔羊腦組織中分離到的2株糞腸球菌XJ3、XJ8為研究對象,探究其對小鼠血腦屏障造成的損傷,并查明小鼠腦組織損傷程度與氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)SOD、MDA以及p38MAPK信號通路的相關(guān)性,為今后的研究提供參考。目的:（1）建立2株糞腸球菌感染小鼠腦部模型并評估。（2）檢測小鼠血腦屏障相關(guān)指標(biāo)AQP4、GFAP、MMP-2和Claudin-5的表達(dá)量情況,分析2株糞腸球菌對血腦屏障造成的損傷程度。（3）研究2株糞腸球菌對小鼠腦部氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)SOD、MDA的變化,判斷糞腸球菌對腦組織的損傷作用。（4）探究致羔羊腦膜炎糞腸球菌與小鼠腦內(nèi)p38MAPK信號通路的相關(guān)性,為研究糞腸球菌穿越血腦屏障的感染機(jī)制奠定... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞對照表
第一章 緒論
    1 糞腸球菌研究進(jìn)展
        1.1 糞腸球菌生物學(xué)特性
        1.2 糞腸球菌的致病性
            1.2.1 糞腸球菌對人的致病性
            1.2.2 糞腸球菌引起動物的疾病
        1.3 糞腸球菌的致病機(jī)制
    2 血腦屏障的研究進(jìn)展
        2.1 血腦屏障的概念
        2.2 血腦屏障的結(jié)及構(gòu)功能
        2.3 影響血腦屏障通透性和腦組織損傷的因素
            2.3.1 Claudin-5 對血腦屏障通透性的影響
            2.3.2 MMP-2 對血腦屏障通透性的影響
            2.3.3 AQP4 對血腦屏障通透性的影響
            2.3.4 GFAP對血腦屏障通透性的影響
            2.3.5 SOD和 MDA對血腦屏障通透性及腦組織損傷的影響
    3 p38MAPK信號通路與腦損傷的相關(guān)性
第二章 試驗(yàn)內(nèi)容
    試驗(yàn)一 2株糞腸球菌穿越小鼠血腦屏障感染模型的構(gòu)建及評估
        1 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 主要儀器
            1.3 菌株來源
            1.4 實(shí)驗(yàn)動物
        2 方法
            2.1 糞腸球菌感染模型的建立
                2.1.1 菌液的平板計數(shù)
                2.1.2 2 株糞腸球菌LD_0和LD_(100) 的測定
                2.1.3 2 株糞腸球菌LD_(50) 的確定
                2.1.4 小鼠感染模型的建立
                2.1.5 細(xì)菌的回收鑒定
                2.1.6 糞腸球菌16S rRNA的檢測
            2.2 利用EB檢測血腦屏障開放狀況
                2.2.1 伊文思藍(lán)染色
                2.2.2 冰凍切片制作
            2.3 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 2 株糞腸球菌感染模型的建立
                3.1.1 2株糞腸球菌LD_(50) 的測定
                3.1.2 兩株菌株LD_(50) 的計算
                3.1.3 細(xì)菌分離培養(yǎng)及涂片染色鏡檢結(jié)果
                3.1.4 特異性片段擴(kuò)增
                3.1.5 感染小鼠臨床癥狀的觀察
            3.2 EB檢測小鼠血腦屏障開放情況結(jié)果
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)二 對小鼠血腦屏障通透性主要結(jié)構(gòu)相關(guān)指標(biāo)AQP4、GFAP、MMP-2和Claudin-5 的分析
        1 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 試驗(yàn)儀器
            1.3 試驗(yàn)動物
            1.4 試驗(yàn)菌株
        2 方法
            2.1 動物模型的制備及樣品的采集
            2.2 qRT-PCR檢測AQP4、GFAP、MMP-2和Claudin-5 基因表達(dá)量
                2.2.1 腦組織總RNA的提取
                2.2.2 反轉(zhuǎn)錄
                2.2.3 目的基因引物的合成
                2.2.4 qRT-PCR反應(yīng)體系及擴(kuò)增程序
                2.2.5 實(shí)時熒光定量PCR結(jié)果分析
            2.3 免疫組織化學(xué)測定MMP-2、Claudin-5、AQP4和GFAP的表達(dá)
            2.4 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 動物模型制備結(jié)果
            3.2 腦組織中MMP-2、Claudin-5、AQP4和GFAP基因水平變化
            3.3 腦組織中MMP-2、Claudin-5、AQP4和GFAP蛋白表達(dá)變化
                3.3.1 AQP4 表達(dá)的免疫組化的動態(tài)觀察
                3.3.3 小鼠腦組織中GFAP免疫組化染色結(jié)果
                3.3.4 Claudin-5 蛋白的表達(dá)
                3.3.4 MMP-2 蛋白的表達(dá)
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)三 對小鼠腦損傷中氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)SOD、MDA的檢測
        1 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 試驗(yàn)儀器
            1.3 菌株來源
            1.4 實(shí)驗(yàn)動物
        2 方法
            2.1 兩菌株感染小鼠模型的制備
            2.2 小鼠血清中SOD和 MDA的測定
            2.3 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 小鼠腦部損傷模型的構(gòu)建
            3.2 小鼠血清中MDA和 SOD的測定
        4 討論
        5 小結(jié)
    試驗(yàn)四 對參與小鼠血腦屏障損傷機(jī)制p38MAPK信號通路的探究
        1 材料
            1.1 主要試劑
            1.2 試驗(yàn)儀器
            1.3 菌株來源
            1.4 實(shí)驗(yàn)動物
        2 方法
            2.1 兩株菌株感染小鼠模型的制備
            2.2 Western-blot檢測p-p38、p38 蛋白的表達(dá)量
                2.2.1 腦組織蛋白的提取
                2.2.2 Western-blot法檢測p-p38、p38 蛋白表達(dá)量
            2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計
        3 結(jié)果
            3.1 小鼠腦部模型的構(gòu)建
            3.2 考馬斯亮藍(lán)染色結(jié)果
            3.4 p-p38 的蛋白表達(dá)變化
        4 討論
        5 小結(jié)
全文總結(jié)
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡歷
課題來源
在校期間發(fā)表文章
石河子大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文導(dǎo)師評閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]阿托伐他汀對局灶性腦缺血大鼠MMP-2 occludin mRNA的影響[J]. 楊會杰,張娟,夏昱,孫環(huán),孟祥光.  中國實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2018(03)
[2]重組人組織型纖溶酶原激活劑靜脈溶栓聯(lián)合亞低溫對急性腦梗死患者血漿中SOD與MDA水平的影響[J]. 鄧紅亮,申健,劉漢臣,孫渺,肖云艷,陳亞超.  山西醫(yī)藥雜志. 2017(17)
[3]糞腸球菌的生物學(xué)特性及其在養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用[J]. 安玉亭,胡浩,王智剛,周新秀.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2015(27)
[4]糞腸球菌致病因子的研究進(jìn)展[J]. 呂娜,高原.  內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2015(04)
[5]褪黑素對腦出血繼發(fā)腦損傷患者血清MDA、NF-κB、TNF-α及β2-MG水平的影響[J]. 高峰,高翔.  中國生化藥物雜志. 2015(06)
[6]糞腸球菌動物致病的研究進(jìn)展[J]. 劉燕霏,楊建德,趙瑞利.  家畜生態(tài)學(xué)報. 2013(11)
[7]糞腸球菌主要毒力因子研究進(jìn)展[J]. 狄婷婷,高原.  中國病原生物學(xué)雜志. 2012(03)
[8]國內(nèi)關(guān)于半數(shù)致死量及類似生物效應(yīng)指標(biāo)測算方法研究進(jìn)展[J]. 楊海智,馬海霞,楊信東.  國外醫(yī)藥(抗生素分冊). 2012(02)
[9]腸球菌毒力因子的研究進(jìn)展[J]. 周霞,王東,王曉蘭,劉雪梅.  中國獸醫(yī)學(xué)報. 2011(08)
[10]p38 MAPK通路在造血系統(tǒng)調(diào)節(jié)中的作用[J]. 李德冠,樊飛躍,孟愛民.  中國藥理學(xué)通報. 2011(01)

博士論文
[1]副豬嗜血桿菌感染致炎癥相關(guān)信號通路的研究[D]. 陳雨珊.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]水通道蛋白-4敲除對小鼠海馬依賴性學(xué)習(xí)記憶和突觸傳遞長時程抑制的影響及機(jī)制[D]. 武鑫.華中科技大學(xué) 2013
[3]感染豬的糞腸球菌的分離鑒定及部分特性和診斷方法研究[D]. 黎滿香.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2010
[4]水通道蛋白4在腦出血水腫形成及細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制研究[D]. 唐宇平.復(fù)旦大學(xué) 2010
[5]顱腦損傷后膠質(zhì)纖維酸性蛋白表達(dá)上調(diào)途徑及其臨床檢測的意義[D]. 王翀昊.吉林大學(xué) 2009
[6]腸球菌性羔羊腦炎的發(fā)現(xiàn)及其病原特性和診斷方法研究[D]. 周霞.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007

碩士論文
[1]開通玄府法對實(shí)驗(yàn)性大鼠腦出血后腦水腫及血腦屏障影響的研究[D]. 王小強(qiáng).西南醫(yī)科大學(xué) 2018
[2]動物源糞腸球菌多重耐藥菌株毒力基因的檢測及相關(guān)性研究[D]. 龔子桓.石河子大學(xué) 2017
[3]新疆某規(guī)模化牛場牛傳染性鼻氣管炎與腸球菌腦膜炎的診斷與防控[D]. 宋健.石河子大學(xué) 2017
[4]衰老海馬Notch、Wnt和MAPK信號通路的關(guān)鍵蛋白表達(dá)變化及補(bǔ)腎方作用機(jī)理研究[D]. 李琳.河南中醫(yī)藥大學(xué) 2017
[5]腦缺血再灌注后TLR-2與MMP-2表達(dá)的變化關(guān)系及其在缺血性腦損傷中的作用機(jī)制[D]. 丁曉蔚.昆明理工大學(xué) 2016
[6]p38 MAPK對大鼠腦缺血再灌注后AQP-4表達(dá)及腦水腫形成的影響[D]. 王耀輝.桂林醫(yī)學(xué)院 2014
[7]大鼠腦缺血早期cav-1、MMP-2/9、緊密連接蛋白的表達(dá)和血腦屏障損傷的關(guān)系[D]. 鐘巍.中南大學(xué) 2014
[8]豬鏈球菌穿血腦屏障毒力因子的篩選及鑒定[D]. 王濤.安徽醫(yī)科大學(xué) 2013
[9]P38MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在腦缺血再灌注損傷中的作用[D]. 余音.重慶醫(yī)科大學(xué) 2013
[10]糞腸球菌對大鼠子宮內(nèi)膜炎模型的治療作用觀察[D]. 郝艷陽.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010



本文編號：3692373