哺乳動物的精卵融合過程是個復(fù)雜而精巧的事件,需要一些特異性蛋白相互作用來介導(dǎo)。其中精子上的PDIA3（ERp57）是蛋白二硫鍵異構(gòu)酶（protein disulfide isomerase, PDI）家族的成員,具有催化二硫鍵的功能,CRISP2是富含半胱氨酸的分泌蛋白（cysteine secretory proteins, CRISPs）家族的成員,具有16個保守的半胱氨酸和它們所形成的復(fù)雜的二硫鍵,這兩種蛋白質(zhì)都參與了精卵的融合過程,但是到目前為止這兩種蛋白質(zhì)在精卵結(jié)合與融合過程中的作用機制尚不清楚。我們猜測PDIA3可能會催化CRISP2分子中的二硫鍵從而引起其構(gòu)象發(fā)生改變而介導(dǎo)精卵融合。為了驗證這一想法,本實驗構(gòu)建了絨山羊PDIA3和CRISP2成熟肽和分段真核表達(dá)載體,用免疫共沉淀和酵母雙雜交技術(shù)檢測了PDIA3與CRISP2能否互相結(jié)合。 首先根據(jù)本實驗室克隆的絨山羊CRISP2（GU362703.1）和PDIA3的cDNA序列（GU985268.1）,分析了它們的結(jié)構(gòu)特點及其功能域后,將其各分為兩段,即CRISP2A （24～176aa,去掉信號肽后）、CRISP... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一部分 研究論文
    第一章 絨山羊CRISP2和PDIA3分段后真核表達(dá)載體和酵母雙雜交載體的構(gòu)建
        前言
        1 材料和方法
            1.1 材料
            1.2 實驗方法
        2 結(jié)果
            2.1 真核表達(dá)載體pcDNA-CRISP2、pcDNA-CRISP2A、pcDNA-CRISP2B、pcDNA-Pdia3、pcDNA-Pdia3A、pcDNA-Pdia3B的構(gòu)建
            2.2 酵母載體pGADT7-CRISP2A、pGADT7-CRISP2B、pGBKT7-PDIA3A和pGBKT7-PDIA3B的構(gòu)建
        3 討論
    第二章 CRISP2與PDIA3的相互結(jié)合的鑒定
        前言
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 實驗步驟
        2 結(jié)果
            2.1 免疫共沉淀及Western blot結(jié)果
            2.2 CRISP2與PDIA3的酵母雙雜交鑒定結(jié)果
        3 討論
第二部分 文獻(xiàn)綜述 絨山羊CRISP2和PDIA3的結(jié)構(gòu)及其功能
    1. CRISP2蛋白的結(jié)構(gòu)特點和功能特點
    2. PDIA3蛋白的結(jié)構(gòu)特點和功能特點
        2.1 PDIA3在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的作用
        2.2 細(xì)胞表面的PDIA3
        2.3 細(xì)胞液中的PDIA3
        2.4 細(xì)胞核中的PDIA3
        2.5 線粒體中的PDIA3
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文和參加的項目



本文編號：3690293