H9N2亞型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）屬于低致病性AIV,可引起家禽、野鳥、人類等發(fā)生感染。鳥類感染H9N2亞型AIV,多呈隱性感染或者表現(xiàn)出輕微的臨床癥狀,但是其消化道和呼吸道有不同程度的損傷。鵪鶉作為H9N2亞型AIV的一種宿主,不僅可以引發(fā)感染,而且還可以將病毒傳播給其他鳥類、哺乳動物和人類。以往的研究表明,鵪鶉和雞感染H9N2亞型AIV,鵪鶉表現(xiàn)出比雞更高的易感性,肺表現(xiàn)出比雞更嚴重的病理損傷。目前關(guān)于H9N2亞型AIV感染雞的致病機制已經(jīng)趨于完善,而關(guān)于H9N2亞型AIV感染鵪鶉的分子致病機制尚不明確。本研究選用一株分離于湖北省荊門市活禽市場的H9N2亞型AIV（A/chicken/Jinmen/JM0305/2017）,將病毒以10^7.0 EID₅₀/100μl的劑量滴鼻感染28日齡鵪鶉,通過組織病理學(xué)、免疫學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)綜合分析H9N2亞型AIV感染鵪鶉的分子致病機制及免疫應(yīng)答機制,為鵪鶉禽流感的防控提供理論依據(jù)。研究結(jié)果如下:1.H9N2亞型AIV感染鵪鶉的組織病理學(xué)分析鵪鶉感染H9N2亞型... 

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 文獻綜述
    1.1 禽流感病毒概況
        1.1.1 禽流感病毒的分類
        1.1.2 AIV各結(jié)構(gòu)蛋白對其生物學(xué)特性的影響
        1.1.3 禽流感的爆發(fā)與流行
        1.1.4 先天免疫調(diào)節(jié)相關(guān)信號通路對AIV的影響
    1.2 H9N2亞型AIV對鳥類的危害
        1.2.1 H9N2亞型AIV的傳播與突變
        1.2.2 H9N2亞型AIV感染其它家禽
    1.3 H9N2亞型AIV感染鵪鶉的研究進展
        1.3.1 鵪鶉簡介
        1.3.2 鵪鶉在H9N2亞型AIV研究中的重要性
        1.3.3 H9N2亞型AIV感染鵪鶉
    1.4 轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)
        1.4.1 轉(zhuǎn)錄組測序簡介
        1.4.2 Illumina測序平臺簡介
        1.4.3 轉(zhuǎn)錄組測序在AIV研究中的應(yīng)用
    1.5 研究目的與意義
2 試驗材料及方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 病毒及實驗動物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 試驗方法
        2.2.1 鵪鶉感染試驗
        2.2.2 石蠟切片制作及HE染色
        2.2.3 免疫組織化學(xué)染色
        2.2.4 肺組織RNA提取
        2.2.5 肺組織c DNA合成
        2.2.6 熒光定量PCR檢測
            2.2.6.1 引物設(shè)計
            2.2.6.2 熒光定量PCR分析
        2.2.7 轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
            2.2.7.1 提取Total RNA
            2.2.7.2 Oligo dT富集mRNA
            2.2.7.3 mRNA片段化
            2.2.7.4 cDNA合成和adaptor連接
            2.2.7.5 Illumina Hiseq上機測序
            2.2.7.6 測序數(shù)據(jù)質(zhì)量剪切及統(tǒng)計
        2.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析
            2.2.8.1 熒光定量PCR驗證結(jié)果分析
            2.2.8.2 轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果分析
3 結(jié)果
    3.1 鵪鶉感染H9N2亞型AIV的大體病理變化
    3.2 H9N2亞型AIV感染鵪鶉的病理學(xué)研究
    3.3 肺轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
        3.3.1 物種篩選
        3.3.2 基因差異表達聚類分析
        3.3.3 差異表達基因統(tǒng)計學(xué)分析及分類
        3.3.4 差異表達基因GO分析
        3.3.5 差異表達基因KEGG通路富集分析
        3.3.6 免疫相關(guān)DEGs之間蛋白互作關(guān)系
        3.3.7 熒光定量PCR驗證
4 討論
    4.1 H9N2亞型AIV感染鵪鶉的組織學(xué)分析
        4.1.1 H9N2亞型AIV感染鵪鶉的大體病理變化
        4.1.2 H9N2亞型AIV感染鵪鶉的組織病理學(xué)分析
    4.2 H9N2亞型AIV感染鵪鶉肺轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析
        4.2.1 免疫相關(guān)DEGs對比分析
        4.2.2 GO分析
        4.2.3 免疫系統(tǒng)相關(guān)信號通路
        4.2.4 信號通路關(guān)聯(lián)分析
        4.2.5 蛋白互作分析
5 結(jié)論
參考文獻
附錄1 學(xué)術(shù)成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]14-3-3蛋白在人類疾病中的研究進展[J]. 唐裕福,張怡冰,馮曉東,林紳暉,喬娜,孫忠怡,周文平.  世界華人消化雜志. 2017(06)
[2]Astragalus polysaccharide enhances immunity and inhibits H9N2 avian influenza virus in vitro and in vivo[J]. Sanpha Kallon,Xiaorong Li,Jun Ji,Cuiying Chen,Qianyun Xi,Shuang Chang,Chunyi Xue,Jingyun Ma,Qingmei Xie,Youngliang Zhang.  Journal of Animal Science and Biotechnology. 2013(04)
[3]《現(xiàn)代分子生物學(xué)》（第4版）（雙色版）[J]. 朱玉賢,李毅,鄭曉峰,郭紅衛(wèi).  生命世界. 2013(03)
[4]H9N2亞型禽流感病毒人工感染蛋雞的組織病理學(xué)研究[J]. 羅玲,胡薛英,程國富谷長勤,周全,李自力,趙雅心,周詩其,畢丁仁.  中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報. 2004(04)

博士論文
[1]H5N1亞型禽流感病毒感染雞脾臟蛋白質(zhì)組和轉(zhuǎn)錄組差異研究[D]. 趙玉輝.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]禽流感病毒感染雞的病毒定位及基因差異表達研究[D]. 張萬坡.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006

碩士論文
[1]神經(jīng)毒力禽流感病毒感染神經(jīng)細胞的轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究及神經(jīng)入侵途徑初探[D]. 張軍.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018



本文編號：3687269