為建立一種靈敏、特異、快速的牛巴貝斯蟲(chóng)檢測(cè)方法,針對(duì)牛巴貝斯蟲(chóng)Rap-1a基因設(shè)計(jì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,然后構(gòu)建重組質(zhì)粒制作標(biāo)準(zhǔn)品,經(jīng)過(guò)優(yōu)化反應(yīng)體系、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立了牛巴貝斯蟲(chóng)TaqMan熒光定量PCR方法,并進(jìn)行靈敏度、特異性及穩(wěn)定性檢測(cè),同時(shí)利用該方法對(duì)37份田間樣品進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示:建立的牛巴貝斯蟲(chóng)TaqMan熒光定量PCR檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式為y=-3.362×Log（X）+43.32,相關(guān)系數(shù)R~2=0.999,擴(kuò)增效率為98.4%。該方法的靈敏度為1.0×10~2 copies/μL,是普通PCR（1.0×10~4 copies/μL）的100倍。該方法對(duì)牛雙芽巴貝斯蟲(chóng)、大巴貝斯蟲(chóng)、卵形巴貝斯蟲(chóng)等7種常見(jiàn)的牛梨形蟲(chóng)病檢測(cè)結(jié)果均為陰性,組內(nèi)和組間重復(fù)試驗(yàn)的變異系數(shù)均小于2.5%,37份田間樣品的陽(yáng)性檢出率為67.5%。結(jié)果表明,本試驗(yàn)建立的牛巴貝斯蟲(chóng)TaqMan熒光定量PCR靈敏度高,且特異、穩(wěn)定,適用于牛巴貝斯蟲(chóng)的診斷,從而為其流行病學(xué)調(diào)查提供了快速有效的檢測(cè)方法。 

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑和菌株及主要儀器
    1.2 基因組
    1.3 引物和探針的設(shè)計(jì)與合成
    1.4 常規(guī)PCR擴(kuò)增
    1.5 標(biāo)準(zhǔn)品重組質(zhì)粒制備
    1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)條件優(yōu)化
    1.7 實(shí)時(shí)熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)曲線建立
    1.8 敏感性試驗(yàn)
    1.9 特異性試驗(yàn)
    1.1 0 穩(wěn)定性試驗(yàn)
    1.1 1 應(yīng)用性檢測(cè)
2 結(jié)果
    2.1 標(biāo)準(zhǔn)品重組質(zhì)粒制備及濃度檢測(cè)
    2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
    2.3 牛巴貝斯蟲(chóng)Taq Man熒光定量PCR的靈敏度、特異性與穩(wěn)定性檢測(cè)
    2.4 應(yīng)用性檢測(cè)
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