大腸桿菌病是威脅人類和動物健康的重要疾病之一。對于畜禽養(yǎng)殖業(yè)來說,動物種群中大腸桿菌病的流行和暴發(fā)往往帶來巨大的經(jīng)濟損失,例如斷乳仔豬水腫病、仔豬黃、白痢等,在養(yǎng)豬業(yè)中發(fā)病率和死亡率都較高。其中仔豬水腫病尤為嚴重,死亡率最高可達90%�，F(xiàn)今,已有多種致病性大腸桿菌病原體可引起人畜共患病,加之菌株耐藥現(xiàn)象的增多都給疾病的預(yù)防和治療帶來新的困難,多重耐藥大腸桿菌在臨床上更是多見,因此對致病性大腸桿菌毒力因子和耐藥性的研究已成為現(xiàn)階段科研研究的熱點和難點。 本實驗的目的是研究接合性質(zhì)粒在致病性大腸桿菌傳播耐藥基因和毒力基因中的作用,以及由基因水平傳播所引起菌株在毒力和耐藥性方面的變化,52株實驗用大腸桿菌分離于哈爾濱周邊地區(qū)大腸桿菌病發(fā)病豬場,采用小白鼠體內(nèi)攻毒試驗確定菌株的致病性。本實驗通過質(zhì)粒接合試驗分析致病大腸桿菌的耐藥性、細菌毒力水平傳播的可能性,并比較分析親本菌株和接合子菌株的耐藥性、毒力和毒力基因的變化。通過比較親本菌株與接合子菌株對hep-2細胞的侵襲力評價菌株接合前后毒力的變化。依據(jù)CLSI （Clinical and Laboratory Standars insti... 

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 大腸桿菌概述
    1.2 致病性大腸桿菌
        1.2.1 致病性大腸桿菌分類
        1.2.2 致病性大腸桿菌的致病現(xiàn)狀
        1.2.3 致病性大腸桿菌毒力因子
    1.3 水平基因轉(zhuǎn)移概述
        1.3.1 基因水平傳播的研究機制
        1.3.2 基因水平傳播過程
        1.3.3 接合性質(zhì)粒
    1.4 致病性大腸桿菌體外毒力檢測概述
        1.4.1 HEp-2細胞
        1.4.2 HEp-2細胞用體外細菌侵襲試驗研究
    1.5 選題的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 試劑
        2.1.3 主要儀器與設(shè)備
        2.1.4 主要試劑的配制
    2.2 試驗方法
        2.2.1 試驗菌株的采集
        2.2.2 試驗菌株的分離培養(yǎng)
        2.2.3 試驗菌株的鑒定
        2.2.4 大腸桿菌致病性鑒定
        2.2.5 大腸桿菌的保存
        2.2.6 大腸桿菌體外藥物敏感性檢驗
        2.2.7 大腸桿菌毒力基因檢測
        2.2.8 大腸桿菌質(zhì)粒接合實驗
        2.2.9 接合子菌株耐藥性及毒力基因檢測
        2.2.10 大腸桿菌對HEp-2細胞毒力試驗
3 結(jié)果
    3.1 大腸桿菌分離鑒定結(jié)果
        3.1.1 分離結(jié)果
        3.1.2 生化鑒定結(jié)果
        3.1.3 試驗菌株鏡檢結(jié)果
        3.1.4 大腸桿菌對小白鼠的致病性
    3.2 大腸桿菌的耐藥性
    3.3 52 株大腸桿菌毒力基因的檢測
        3.3.1 大腸桿菌各毒力因子檢出率
        3.3.2 大腸桿菌毒力基因凝膠電泳圖
    3.4 接合實驗結(jié)果
        3.4.1 親本菌株和接合子菌株耐藥表型比較結(jié)果
        3.4.2 阿米卡星對大腸桿菌MIC值和MBC值
    3.5 接合子菌株毒力基因檢測結(jié)果
        3.5.1 毒力因子PCR結(jié)果統(tǒng)計
    3.6 大腸桿菌毒力試驗結(jié)果
        3.6.1 阿米卡星對HEp-2細胞的最大藥物安全濃度
        3.6.2 大腸桿菌對HEp-2細胞毒力測定結(jié)果
    3.7 透射電鏡實驗結(jié)果
        3.7.1 正常HEp-2細胞圖片
        3.7.2 大腸桿菌ATCC25922侵襲HEp-2細胞圖片
        3.7.3 毒力改變菌株侵襲HEp-2細胞圖片
4 討論
    4.1 大腸桿菌藥敏試驗結(jié)果分析
    4.2 毒力基因水平傳播分析
    4.3 致病性大腸桿菌毒力基因分析
        4.3.1 毒力基因之間關(guān)系分析
        4.3.2 大腸桿菌耐藥性與毒力基因關(guān)系分析
    4.4 大腸桿菌侵襲HEp-2細胞結(jié)果分析
        4.4.1 菌株毒力改變分析
        4.4.2 毒力島與大腸桿菌致病性分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3679087