陰陽因子1（YY1）是一種廣泛存在于生物體中并在進化上高度保守的轉錄因子,它可以作為基因表達過程中的激活因子和抑制因子參與許多基因的轉錄調控。為了解YY1基因在水牛植入前胚胎中的表達規(guī)律及其對DNA甲基化的影響和調控作用,本研究克隆了水牛YY1基因編碼序列,構建了其真核表達載體；篩選抑制水牛YY1基因表達的shRNA干擾片段,同時探討了YY1基因過表達對水牛胚胎早期發(fā)育及DNA甲基化的影響。1.水牛YYl基因CDS全長序列克隆及其真核表達載體構建。以水牛成纖維細胞cDNA為模板,采用RT-PCR和降落PCR的方法,擴增水牛YY1基因CDS全長序列。將目的片段連接到pEGFP-N1載體中構建真核表達載體,然后轉染293T細胞和水牛成纖維細胞（BFF）,通過熒光觀察和qRT-PCR方法檢測YY1基因表達情況。結果顯示,克隆得到的水牛YY1基因CDS全長序列為1248bp,與牛、人、小鼠、大鼠及雞的同源性達到90%以上。重組質粒pYY1-EGFP-N1可在293T細胞和水牛成纖維細胞中表達；在水牛體細胞水平上,YY1基因表達可促進DNMT1基因的表達。2.水牛YY1基因表達shRNA干擾片段... 

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
第一部分 文獻綜述
    第一章 YY1基因概述
        1. YY1基因簡介
        2. YY1基因結構
        3. YY1基因的轉錄調控功能
            3.1 YY1基因介導的轉錄抑制作用
            3.2 YY1基因介導的轉錄激活作用
        4. YY1基因在哺乳動物發(fā)育過程中的作用
            4.1 YY1基因與配子生成、胚胎發(fā)育的關系
            4.2 YY1基因與細胞增殖、分化及凋亡的關系
        5. YY1基因與表觀遺傳修飾
            5.1 DNA甲基化與組蛋白甲基化、乙酰化
            5.2 YY1基因與DNA甲基化和組蛋白修飾
        6. 課題研究目的及意義
第二部分 試驗研究
    第二章 水牛YY1基因表達載體構建及shRNA片段篩選
        第一節(jié) 水牛YY1基因克隆及其真核表達載體的構建
            摘要
            1. 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結果
                2.1 水牛YY1基因克隆與測序分析
                2.2 水牛YY1基因真核表達載體構建
                2.3 YY1基因真核表達載體檢測
            3 分析與討論
            4 結論
        第二節(jié) 水牛YY1基因shRNA片段的篩選
            摘要
            1 材料與方法
                1.1 材料
                1.2 方法
            2 結果
                2.1 水牛YY1shRNA重組質粒的鑒定
                2.2 YY1 shRNA抑制效率檢測
                2.3 Western-blot分析shRNA抑制效率
            3 分析與討論
            4 結論
    第三章 YY1基因過表達對水牛早期胚胎發(fā)育及DNA甲基化的影響
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結果
            2.1 質粒濃度對水牛受精卵胞質注射法轉基因效率的影響
            2.2 注射不同外源DNA對水牛胚胎發(fā)育及囊胚形成率影響
            2.3 YY1基因過表達對植入前胚胎DNMT1基因表達影響
        3 分析與討論
        4 結論
參考文獻
致謝
攻讀碩士期間發(fā)表論文



本文編號：3668852