發(fā)布時(shí)間：2022-07-19 10:51

　　雞蛋中的卵黃高磷蛋白（phosvitin）是已知所有蛋白質(zhì)中磷酸化程度最高的蛋白質(zhì),含磷量占蛋黃總磷量的80%,是雞胚骨骼發(fā)育中礦物質(zhì)磷的主要來(lái)源。本文以phosvitin作為研究對(duì)象,圍繞著phosvitin對(duì)雞胚胎骨骼發(fā)育的影響開(kāi)展了系列工作。主要研究?jī)?nèi)容和研究成果摘要如下：研究了雞胚胎發(fā)育期間與骨骼發(fā)育相關(guān)指標(biāo)的變化規(guī)律。發(fā)現(xiàn)雞胚胎發(fā)育9-10d是一個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn)：蛋清pH在9d胚齡以后,逐漸趨于穩(wěn)定,保持在pH7.5左右；蛋黃pH在10d胚齡時(shí)突然上升,達(dá)到最大值8.19,之后呈小幅度下降,在pH7.5附近相對(duì)穩(wěn)定；蛋黃總磷含量在10d胚齡時(shí)出現(xiàn)急劇下降,這與胚胎在9d胚齡開(kāi)始骨化有很大相關(guān)性。比較分析蛋黃磷含量的降低速率、堿性磷酸酶活力變化以及雞胚體長(zhǎng)的增長(zhǎng)發(fā)現(xiàn)三者的變化趨勢(shì)基本一致,先上升后下降。在14-16d總磷下降速率最快,平均達(dá)到0.027mg/g.d, ALP活力也達(dá)到最大值1.12U/gprot,體長(zhǎng)增長(zhǎng)率的變化有一定滯后,在17d胚齡增長(zhǎng)率達(dá)到最大,1.17cm/d,這與蛋黃中的磷被轉(zhuǎn)移到胚胎然后被胚胎骨骼發(fā)育利用需要一定時(shí)間有關(guān)。研究了胚胎發(fā)育的9-20d phos... 

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略語(yǔ)表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 生物礦化的概述
    2 生物礦化與蛋白調(diào)控
    3 磷蛋白對(duì)生物礦化的影響
        3.1 骨橋蛋白與生物礦化
        3.2 骨唾液酸蛋白與生物礦化
        3.3 牙本質(zhì)磷蛋白與生物礦化
        3.4 牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白與生物礦化
    4 Phosvitin與生物礦化
        4.1 Phosvitin的組成和結(jié)構(gòu)
        4.2 Phosvitin與生物礦化
    5 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生物礦化中的應(yīng)用
        5.1 成骨細(xì)胞
        5.2 體外成骨細(xì)胞分離培養(yǎng)的應(yīng)用
        5.3 骨形成有關(guān)的生化指標(biāo)
            5.3.1 堿性磷酸酶(ALP)
            5.3.2 骨鈣蛋白(OCN)
            5.3.3 骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2(BMP-2)
            5.3.4 核心結(jié)合因子(Runx-2)
            5.3.5 Ⅰ型膠原(Col-Ⅰ)
    6 實(shí)時(shí)定量RT-PCR技術(shù)在生物礦化研究中的應(yīng)用
    7 本課題選題的學(xué)術(shù)思想
        7.1 研究目的和意義
        7.2 學(xué)術(shù)思路
        7.3 主要研究?jī)?nèi)容
第二章 雞胚胎發(fā)育期間與骨骼發(fā)育相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 原料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.2.2 蛋黃樣品的采集
            1.2.3 蛋清蛋黃pH測(cè)定
            1.2.4 蛋黃中鈣磷含量的測(cè)定
            1.2.5 胚胎脛骨中ALP活性的測(cè)定
            1.2.6 胚胎體長(zhǎng)及脛骨長(zhǎng)度測(cè)定
            1.2.7 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 孵化期間蛋清、蛋黃pH值的變化
        2.2 孵化期間蛋黃中總鈣、總磷含量的變化
        2.3 孵化期間雞胚脛骨中堿性磷酸酶(ALP)活力的變化
        2.4 孵化期間雞胚脛骨長(zhǎng)度及雞胚體長(zhǎng)的變化
        2.5 相關(guān)性分析
    3 討論
    4 小結(jié)
第三章 雞胚胎發(fā)育過(guò)程中phosvitin的變化
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 原料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.2.2 蛋黃樣品的采集
            1.2.3 phosvitin的分離與純化
            1.2.4 聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)
            1.2.5 Phosvitin中有機(jī)磷含量的測(cè)定
            1.2.6 Phosvitin中有機(jī)氮含量的測(cè)定
            1.2.7 磷蛋比(P/N radio)的計(jì)算
            1.2.8 紅外光譜測(cè)定
            1.2.9 圓二色譜測(cè)定
            1.2.10 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 孵化期間phosvitin分子量測(cè)定
        2.2 孵化期間phosvitin磷氮比的變化
        2.3 孵化期間phosvitin紅外吸收?qǐng)D譜分析
        2.4 孵化期間phosvitin二級(jí)結(jié)構(gòu)的變化
            2.4.1 紅外光譜分析法
            2.4.2 圓二色譜分析法
    3 討論
    4 小結(jié)
第四章 Phosvitin對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 原料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.2.2 Phosvitin提取純化
            1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)操作程序
            1.2.4 CCK-8法測(cè)定細(xì)胞增殖
            1.2.5 流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞周期
            1.2.6 MC3T3-E1細(xì)胞凋亡率的檢測(cè)(流式法)
            1.2.7 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 Phosvitin純度鑒定
        2.2 MC3T3-E1細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定
        2.3 Phosvitin對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞活力的影響
        2.4 Phosvitin對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞周期的影響
        2.5 Phosvitin對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞凋亡的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第五章 Phosvitin對(duì)MC3T3-E1細(xì)胞礦化的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 原料
            1.1.2 主要試劑
            1.1.3 主要儀器和設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
            1.2.2 Phosvitin提取純化
            1.2.3 細(xì)胞培養(yǎng)操作程序
            1.2.4 成骨細(xì)胞中ALP活性測(cè)定
            1.2.5 礦化結(jié)節(jié)茜素紅染色
            1.2.6 MC3T3-E1細(xì)胞總RNA提取與RT-PCR反應(yīng)
            1.2.7 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 誘導(dǎo)礦化實(shí)驗(yàn)的接種密度的確立
        2.2 茜素紅染色結(jié)果
        2.3 堿性磷酸酶(ALP)活力測(cè)定結(jié)果
        2.4 MC3T3-E1誘導(dǎo)礦化相關(guān)基因mRNA表達(dá)量的測(cè)定
            2.4.1 不同礦化誘導(dǎo)劑對(duì)Runx-2 mRNA表達(dá)量的影響
            2.4.2 不同礦化誘導(dǎo)劑對(duì)BMP-2 mRNA表達(dá)量的影響
            2.4.3 不同礦化誘導(dǎo)劑對(duì)Col-Ⅰ mRNA表達(dá)量的影響
            2.4.4 不同礦化誘導(dǎo)劑對(duì)OCN mRNA表達(dá)量的影響
    3 討論
    4 小結(jié)
第六章 結(jié)論和展望
    1 結(jié)論
    2 創(chuàng)新性
    3 延續(xù)研究計(jì)劃
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3663280