多年來(lái)對(duì)豬選擇培育的一個(gè)重要目標(biāo)是提高生長(zhǎng)速度和瘦肉率,并已在遺傳上改良取得了一定的進(jìn)展。瘦肉豬的選育使豬肉中酵解型纖維比例增加、肌纖維直徑增大、豬肉的嫩度、多汁性、風(fēng)味,肉色、肌內(nèi)脂肪和pH值等肉質(zhì)因素均受到嚴(yán)重影響。研究發(fā)現(xiàn)Ⅰ型纖維與肌內(nèi)脂肪含量,肌肉的嫩度呈正相關(guān)；而與纖維直徑,pH45MIN,滴水損失呈負(fù)相關(guān)。ⅡB纖維橫切面積大,導(dǎo)致豬肉系水力和剪切力的降低,ⅡB纖維中含有大量的酵解酶,在屠宰后45分鐘,肌肉中乳酸和糖原升高,肌肉pH下降,肉色灰白,且系水力低下,滴水損失也與ⅡB型纖維正相關(guān)。PGC-1α是細(xì)胞能量代謝的關(guān)鍵調(diào)控因子,參與調(diào)控線(xiàn)粒體的生成,調(diào)控線(xiàn)粒體的融合和分裂。小鼠實(shí)驗(yàn)顯示,骨骼肌中超表達(dá)PGC-1α?xí)碳ぞ�(xiàn)粒體的生成,并能促進(jìn)骨骼肌中ⅡB纖維向Ⅰ型的轉(zhuǎn)變,增加氧化型纖維的比例。因此,本研究以PGC-1α為候選基因,構(gòu)建肌肉特異性真核表達(dá)載體,在構(gòu)建轉(zhuǎn)基因小鼠模型的基礎(chǔ)上,制備轉(zhuǎn)PGC-1α基因的大白豬,研究PGC-1α對(duì)豬肌肉中能量代謝,肌肉類(lèi)型轉(zhuǎn)變,以及豬肉肉質(zhì)的影響。取得的主要成果如下：1.以真核表達(dá)載體pEGFP-Nl為基礎(chǔ),豬BAC文庫(kù)同源重組的7k... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 骨骼肌概論
        1.1.1 骨骼肌分類(lèi)
        1.1.2 肌肉的組織分布
        1.1.3 不同肌肉類(lèi)型的差異
        1.1.4 肌肉的轉(zhuǎn)變
    1.2 肌纖維與肉質(zhì)
        1.2.1 肉質(zhì)性狀
        1.2.2 肌纖維類(lèi)型影響豬肉肉質(zhì)
        1.2.3 肌纖維中影響肉質(zhì)的因素
    1.3 PGC-1α研究進(jìn)展
        1.3.1 PGC-1α基因家族結(jié)構(gòu)特征和生物學(xué)特性
        1.3.2 PGC-1α的生物學(xué)功能
    1.4 研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 主要儀器設(shè)備和試劑
        2.1.1 主要儀器與設(shè)備
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 常用化學(xué)試劑及其配制
        2.1.4 載體
        2.1.5 主要分子生物學(xué)軟件及數(shù)據(jù)庫(kù)
    2.2 試驗(yàn)方法
        2.2.1 p-sMCK-sPGC-1α載體構(gòu)建及鑒定
        2.2.2 轉(zhuǎn)基因小鼠制備與表達(dá)檢測(cè)
        2.2.3 豬胚胎成纖維轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系的建立與檢測(cè)
        2.2.4 轉(zhuǎn)基因豬的制備
        2.2.5 轉(zhuǎn)基因豬的初步分子檢測(cè)
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 p-sMCK-sPGC-1α載體的構(gòu)建
        3.1.1 pMD18-sPGC-1α載體和pEGFP-sMCK載體的雙酶切
        3.1.2 連接雙酶切的產(chǎn)物
        3.1.3 p-sMCK-sPGC-1α載體線(xiàn)性化Swa Ⅰ酶切位點(diǎn)的加入
        3.1.4 p-sMCK-sPGC-1α載體的PCR鑒定
        3.1.5 p-sMCK-sPGC-1α載體的酶切鑒定
        3.1.6 序列測(cè)定對(duì)載體信息的確認(rèn)
    3.2 轉(zhuǎn)基因小鼠的制備及檢測(cè)鑒定分析
        3.2.1 轉(zhuǎn)基因小鼠原代及F1代基因組DNA的PCR檢測(cè)鑒定
        3.2.2 轉(zhuǎn)基因小鼠的Southern Blot分析鑒定
        3.2.3 PGC-1α轉(zhuǎn)基因小鼠的肌肉外觀形態(tài)變化
        3.2.4 PGC-1α轉(zhuǎn)基因小鼠骨骼肌中相關(guān)基因RNA水平表達(dá)分析
        3.2.5 轉(zhuǎn)基因小鼠的Western blot檢測(cè)
        3.2.6 小鼠腓腸肌切片ATP酶異染
    3.3 30日齡豬胚胎成纖維細(xì)胞分離與轉(zhuǎn)染
        3.3.1 30日齡豬胚胎成纖維細(xì)胞分離
        3.3.2 豬胎兒成纖維細(xì)胞的p-sMCK-sPGC-1α載體穩(wěn)轉(zhuǎn)
    3.4 體細(xì)胞克隆轉(zhuǎn)基因豬的制備及分析
        3.4.1 豬陽(yáng)性成纖維細(xì)胞
        3.4.2 轉(zhuǎn)PGC-1α載體克隆豬PCR鑒定
        3.4.3 轉(zhuǎn)PGC-1α載體克隆豬定量PCR鑒定
        3.4.4 轉(zhuǎn)基因豬中PGC-1α拷貝數(shù)分析
        3.4.5 轉(zhuǎn)基因豬中PGC-1α整合位點(diǎn)分析
        3.4.6 轉(zhuǎn)基因豬外觀形態(tài)變化
        3.4.7 轉(zhuǎn)基因豬肌肉中PGC-1α及下游基因RNA水平檢測(cè)
        3.4.8 轉(zhuǎn)基因豬腓腸肌ATP酶染色
        3.4.9 轉(zhuǎn)基因豬F1代肉質(zhì)測(cè)定
第四章 討論
    4.1 PGC-1α與肌纖維轉(zhuǎn)變
    4.2 PGC-1α與糖代謝脂肪酸氧化
    4.3 PGC-1α與線(xiàn)粒體
    4.4 PGC-1α與豬肉肉質(zhì)
第五章 結(jié)論
    5.1 主要研究成果
    5.2 主要?jiǎng)?chuàng)新點(diǎn)
    5.3 研究的不足之處
    5.4 下一步工作
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3661029