禽偏肺病毒（Avian metapneumovirus,aMPV）,又稱火雞鼻氣管炎病毒（Turkey rhinotracheitis virus, TRTV）,早期稱為禽肺病毒（Avian pneumovirus, APV）,該病毒最早于1978年從南非發(fā)病火雞中分離得到,之后在世界范圍內(nèi)蔓延傳播。aMPV是副粘病毒科、肺病毒亞科、偏肺病毒屬成員,有囊膜,屬單節(jié)段負鏈RNA病毒。病毒mRNA的加工處理對病毒基因的表達與病毒基因組的復制至關(guān)重要,mRNA的加工處理過程包括加帽、甲基化和聚腺苷酸化。其中加帽和甲基化對mRNA的穩(wěn)定、翻譯及基因表達最為重要,這些加工過程需要一系列的酶促反應(yīng),AMPV復制過程中的上述一系列酶促反應(yīng)均由其L蛋白負責完成。對于單股負鏈R.NA病毒而言,其L蛋白包括六個高度保守的功能域,分別為CRⅠ、CRⅡ、CRⅢ、 CRIV、 CRV和CRVI功能域。單股負鏈RNA病毒具有獨特的mRNA甲基化機制。生物信息學分析顯示,aMPV L蛋白CRVI功能域具有g(shù)uanine-N-7 （G-N-7）和ribose2’-O（2’-O）甲基轉(zhuǎn)移酶催化活性,這兩個甲基轉(zhuǎn)移酶活性... 

【文章頁數(shù)】：155 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一部分 文獻綜述
    1. 禽偏肺病毒分類地位
    2. 流行病學及臨床特征
    3. 診斷學研究
    4. 禽偏肺病毒基因組結(jié)構(gòu)及蛋白特性
        4.1 核蛋白(nucleocapsid protein,N)
        4.2 磷蛋白(phosphoprotein,P)
        4.3 基質(zhì)蛋白(matrix protein,M)
        4.4 融合蛋白(fusion protein,F)
        4.5 糖蛋白(glycoprotein,G)
        4.6 小疏水蛋白(small hydrophobic protein,SH)
        4.7 基質(zhì)蛋白M2
        4.8 大多聚酶蛋白(large subunit of the Polymerase,L)
    5. 禽偏肺病毒的復制及侵染機制
    6. 禽偏肺病毒反向遺傳學研究
    7. 禽偏肺病毒的RNA甲基化酶的功能位點研究
    8. 禽偏肺病毒的控制及疫苗研發(fā)
        8.1 疫苗的研發(fā)
        8.2 疾病的治療與控制
    9. 本研究的意義
第二部分 研究內(nèi)容
    第一章 禽偏肺病毒mRNA甲基化過程RNA結(jié)合位點生物信息學分析
        摘要
        1. 引言
        2. 生物學軟件的應(yīng)用與分析
        3. 單節(jié)段負鏈(NNS)RNA病毒L蛋白第Ⅵ功能域序列分析
        4. 結(jié)果
    第二章 禽偏肺病毒科羅拉多株(aMPV/CO)突變體病毒的拯救及特性分析
        摘要
        1. 引言
        2. 材料和方法
            2.1 病毒、細胞、載體和分子生物學試劑
            2.2 質(zhì)粒突變體pCITE-L的構(gòu)建及鑒定
            2.3 小基因組試驗(minigenome assay)
            2.4 質(zhì)粒突變體paMPV/CO的構(gòu)建及鑒定
            2.5 禽偏肺病毒突變株的拯救
            2.6 逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)及測序鑒定
            2.7 禽偏肺病毒突變株生長特性分析
            2.8 禽偏肺病毒突變株甲基化研究
        3. 結(jié)果
            3.1 質(zhì)粒突變體pCITE-L的構(gòu)建及鑒定
            3.2 小基因組試驗對L蛋白突變體的功能鑒定
            3.3 質(zhì)粒突變體pBR322的構(gòu)建及鑒定
            3.4 禽偏肺病毒突變株的拯救和鑒定
            3.5 重組病毒噬斑大小測定
            3.6 重組病毒復制能力測定
            3.7 重組禽偏肺病毒Guanine-N-7位點甲基化研究
            3.8 重組禽偏肺病毒2'-O位點甲基化研究
        4. 討論
    第三章 禽偏肺病毒甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷株致病性研究
        摘要
        1. 引言
        2. 材料與方法
            2.1 實驗動物
            2.2 病毒和細胞生物學試劑
            2.3 重組禽偏肺病毒對火雞致病性的研究
        3. 結(jié)果
            3.1 火雞臨床癥狀觀察
            3.2 鼻竇,氣管及肺臟病毒滴度及毒基因組RNA的檢測
            3.3 組織學研究
        4. 討論
    第四章 禽偏肺病毒甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷株免疫原性研究
        摘要
        1. 引言
        2. 材料與方法
            2.1 試驗動物
            2.2 病毒和細胞生物學試劑
            2.3 重組禽偏肺病毒對火雞免疫原性的研究
        3. 結(jié)果
            3.1 癥狀觀察
            3.2 血清中和抗體檢測
        4. 討論
    第五章 結(jié)論與展望
        1. 結(jié)論
        2. 研究展望
            2.1 研究甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷型raMPV疫苗的遺傳學穩(wěn)定性
            2.2 優(yōu)化甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷型raMPV候選疫苗的免疫策略
            2.3 評估甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷型raMPV疫苗的交叉保護
            2.4 研究甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷型raMPV毒株引發(fā)保護性免疫應(yīng)答的機制
            2.5 提高甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷型raMPV疫苗的產(chǎn)率
            2.6 利用甲基轉(zhuǎn)移酶缺陷型raMPV作為載體傳遞其他人類副粘病毒抗原
            2.7 甲基轉(zhuǎn)移酶催化位點和RNA結(jié)合位點攜帶突變的raMPV毒株拯救和鑒定
參考文獻
主要名詞縮寫
作者簡介
攻讀博士期間的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]洋蔥根端分生組織細胞核中RNA多聚酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄位置的研究[J]. 胡波,邢苗.  實驗生物學報. 1999(02)



本文編號：3658348