Hedgehog（Hh）信號(hào)通路是動(dòng)物機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育以及維持正常生命活動(dòng)所不可缺少的一個(gè)信號(hào)通路，幾乎所有動(dòng)物組織其正常功能的發(fā)揮都離不開(kāi)這一通路的調(diào)控。在多種中胚層來(lái)源的細(xì)胞中的研究也表明，Hh信號(hào)通路對(duì)于這些細(xì)胞的增殖及分化有著重要的調(diào)控作用。肉牛肌肉的生長(zhǎng)狀態(tài)及結(jié)構(gòu)直接影響著牛肉的產(chǎn)量和肉質(zhì)，而肌肉中的衛(wèi)星細(xì)胞（MuSC）作為出生后肌肉生長(zhǎng)和損傷修復(fù)的后備力量，它的活動(dòng)和活力對(duì)于肌肉生長(zhǎng)發(fā)育有著很關(guān)鍵的作用。本文即通過(guò)檢測(cè)體內(nèi)肌肉組織的基因表達(dá)量和檢測(cè)體外的MuSC的增殖及分化相關(guān)活動(dòng)，研究Hh信號(hào)通路在肌肉組織及細(xì)胞中的表達(dá)情況，并通過(guò)Hh信號(hào)通路的抑制劑cyclopamine和激動(dòng)劑purmorphamine研究Hh信號(hào)通路的活性對(duì)于MuSC增殖和分化的影響。在本研究中，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)了秦川牛各組織中、肌肉來(lái)源的各種細(xì)胞中以及MuSC增殖和分化過(guò)程中相關(guān)基因的相對(duì)表達(dá)水平；通過(guò)細(xì)胞流式技術(shù)等檢測(cè)了MuSC的增殖程度和細(xì)胞周期的比例；通過(guò)分別使用含2%馬血清的培養(yǎng)液和含有胰島素等藥物的培養(yǎng)液對(duì)分離的牛MuSC進(jìn)行了成肌和成脂誘導(dǎo)；另外還通過(guò)腺病毒介導(dǎo)的C/EBP... 

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1. HEDGEHOG（HH）信號(hào)通路
        1.1.1. 概述
        1.1.2. Hh 信號(hào)通路的傳導(dǎo)途徑（圖 1‐1）
        1.1.3. Hh 信號(hào)通路的主要功能
        1.1.4. Hh 信號(hào)通路與其它信號(hào)或因子的關(guān)系
        1.1.5. Hh 信號(hào)通路的調(diào)節(jié)物
    1.2. 肌肉衛(wèi)星細(xì)胞
        1.2.1. 肌肉的發(fā)育規(guī)律
        1.2.2. 肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的地位和作用
        1.2.3. 肌肉衛(wèi)星細(xì)胞相關(guān)的信號(hào)因子和基因調(diào)節(jié)
        1.2.4. 肌肉衛(wèi)星細(xì)胞與肉牛生產(chǎn)
    1.3. HH 信號(hào)通路對(duì)細(xì)胞增殖及分化的調(diào)控研究
        1.3.1. Hh 信號(hào)通路與細(xì)胞增殖
        1.3.2. Hh 信號(hào)通路與中胚層來(lái)源的細(xì)胞的分化
    1.4. 本研究的目的和意義
第二章 HH 信號(hào)通路成員在牛不同組織的特異性表達(dá)分析
    2.1. 材料與方法
        2.1.1. 樣品采集
        2.1.2. 組織中總 RNA 提取
        2.1.3. 反轉(zhuǎn)錄 PCR
        2.1.4. 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR
        2.1.5. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
    2.2. 結(jié)果分析
        2.2.1. Ptch1 基因在牛各組織中的表達(dá)情況
        2.2.2. Smo 基因在牛各組織中的表達(dá)情況
        2.2.3. Gli1 基因在牛各組織中的表達(dá)情況
        2.2.4. Gli2 基因在牛各組織中的表達(dá)情況
    2.3. 討論
    2.4. 小結(jié)
第三章 牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
    3.1. 材料與方法
        3.1.1. 牛 MuSC 的原代分離及培養(yǎng)
        3.1.2. 細(xì)胞免疫熒光鑒定
        3.1.3. 細(xì)胞中總 RNA 的提取
        3.1.4. 反轉(zhuǎn)錄 PCR
        3.1.5. 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR
        3.1.6. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
    3.2. 結(jié)果分析
        3.2.1. 根據(jù)貼壁能力分離出不同的細(xì)胞類群
        3.2.2. 免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定結(jié)果
        3.2.3. Hh 通路成員在牛肌肉來(lái)源的不同細(xì)胞類群中的表達(dá)情況
    3.3. 討論
        3.3.1 肌肉組織原代細(xì)胞的分離和鑒定
        3.3.2 各細(xì)胞類群中 Hh 信號(hào)通路成員的表達(dá)情況
    3.4. 小結(jié)
第四章 HH 信號(hào)通路對(duì)牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞增殖的影響
    4.1. 材料與方法
        4.1.1. 生長(zhǎng)曲線的繪制
        4.1.2. 細(xì)胞周期的檢測(cè)
        4.1.3. 細(xì)胞中總 RNA 的提取
        4.1.4. 反轉(zhuǎn)錄 PCR
        4.1.5. 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR
        4.1.6. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
    4.2. 結(jié)果分析
        4.2.1. Cyclopamine 濃度對(duì)生長(zhǎng)曲線的影響
        4.2.2. 細(xì)胞周期的流式檢測(cè)結(jié)果
        4.2.3. 細(xì)胞周期蛋白的基因表達(dá)情況
    4.3. 討論
    4.4. 小結(jié)
第五章 HH 信號(hào)通路對(duì)牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化的作用研究
    5.1. 材料與方法
        5.1.1. 牛 MuSC 的成肌分化
        5.1.2. 細(xì)胞中總 RNA 的提取
        5.1.3. 反轉(zhuǎn)錄 PCR
        5.1.4. 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR
        5.1.5. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
    5.2. 結(jié)果分析
        5.2.1. 不同濃度 cyclopamine 對(duì)牛 MuSC 成肌分化的影響
        5.2.2. Hh 信號(hào)通路激動(dòng)劑 purmorphamine 牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞成肌分化的影響
    5.3. 討論
        5.3.1. 在成肌分化過(guò)程中 Hh 信號(hào)通路的變化情況
        5.3.2. 肌肉細(xì)胞成肌分化的發(fā)生
        5.3.3. 成肌分化過(guò)程中相關(guān)因子的基因表達(dá)
    5.4. 小結(jié)
第六章 HH 信號(hào)通路對(duì)牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞成脂分化的作用研究
    6.1. 材料與方法
        6.1.1. 通過(guò)過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)牛 MuSC 的成脂分化
        6.1.2. 含胰島素的誘導(dǎo)液誘導(dǎo)牛 MuSC 的成脂分化
        6.1.3. 細(xì)胞中總 RNA 的提取
        6.1.4. 反轉(zhuǎn)錄 PCR
        6.1.5. 熒光實(shí)時(shí)定量 PCR
        6.1.6. 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)及分析
    6.2. 結(jié)果分析
        6.2.1. 過(guò)表達(dá) C/EBPα誘導(dǎo)牛 MuSC 成脂分化過(guò)程中 Hh 信號(hào)通路組分的表達(dá)情況
        6.2.2. 過(guò)表達(dá) ADIG 誘導(dǎo)牛 MuSC 成脂分化過(guò)程中 Hh 信號(hào)通路組分的表達(dá)情況
        6.2.3. 不同濃度 Cyclopamine 對(duì)牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞成脂分化的影響
        6.2.4. Hh 信號(hào)通路激動(dòng)劑 Purmorphamine 牛肌肉衛(wèi)星細(xì)胞成脂分化的影響
    6.3. 討論
        6.3.1. 牛 MuSC 成脂過(guò)程中 Hh 信號(hào)通路的變化情況
        6.3.2. 成脂過(guò)程中相關(guān)因子的作用關(guān)系
        6.3.3. Hh 信號(hào)對(duì)于牛 MuSC 成脂的影響
    6.4. 小結(jié)
第七章 結(jié)論及創(chuàng)新點(diǎn)
    （一）結(jié)論
    （二）創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
    一、所用到的主要儀器設(shè)備
    二、所用到的主要試劑及耗材
    三、總 RNA 的提取
    四、反轉(zhuǎn)錄 PCR
    五、熒光實(shí)時(shí)定量 PCR
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞對(duì)肉品質(zhì)的影響及其分化調(diào)控[J]. 沈林園,張順華,吳澤輝,鄭夢(mèng)月,李學(xué)偉,朱礪.  遺傳. 2013(09)
[2]豬Gli1基因的克隆、表達(dá)譜分析及脂肪組織特異性表達(dá)載體的構(gòu)建[J]. 林佳麗,沈良才,潘登科,張瑾.  遺傳. 2012(10)
[3]LiCl激活經(jīng)典Wnt信號(hào)通路誘導(dǎo)豬骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞向慢肌分化[J]. 楊秋梅,劉月光,沈清武,史新娥,楊公社.  中國(guó)畜牧雜志. 2012(11)
[4]音猬因子調(diào)控BMSCs表達(dá)和分泌VEGF及bFGF的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 蔡加琴,黃益洲,陳曉禾,謝紅蕾,黃永燦,鄧力.  中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2012(01)
[5]Hedgehog信號(hào)通路對(duì)MSCs的調(diào)控[J]. 蔡加琴,鄧力.  中國(guó)修復(fù)重建外科雜志. 2010(08)
[6]Shh在指發(fā)育過(guò)程中的作用及其表達(dá)的調(diào)節(jié)[J]. 譚海民,趙魯杭.  中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào). 2010(03)
[7]肌衛(wèi)星細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 陳曉萍,范明.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2003(02)

博士論文
[1]牛CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白家族（C/EBPs）誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究[D]. 王虹.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013
[2]牛SHH基因通過(guò)PPARg通路調(diào)控脂肪生成[D]. 滑留帥.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2012
[3]家蠶細(xì)胞周期蛋白家族基因的表達(dá)特點(diǎn)及功能分析[D]. 劉麗華.蘇州大學(xué) 2011
[4]Hedgehog信號(hào)通路在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用及其機(jī)制[D]. 成薇婷.華中科技大學(xué) 2009

碩士論文
[1]C/EBPα基因誘導(dǎo)牛成肌細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究[D]. 皇甫一凡.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2013
[2]對(duì)細(xì)胞周期時(shí)程補(bǔ)償和同步化機(jī)制的計(jì)算研究[D]. 劉文音.南方醫(yī)科大學(xué) 2013
[3]細(xì)胞周期蛋白生物信息學(xué)分析[D]. 萬(wàn)晶.西南交通大學(xué) 2012



本文編號(hào)：3649737