肌肉生長抑制素（myostatin，MSTN），又稱GDF-8（growth differentiationfactor8），是體內(nèi)廣泛存在的一種糖蛋白，屬于轉(zhuǎn)化生長β（transforming growthfactor β, TGF-β）超家族，是骨骼肌生長和發(fā)育的負(fù)調(diào)控因子，主要作用是抑制成肌細(xì)胞的增生與分化。研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠體內(nèi)注射MSTN抗體可以增加骨骼肌的量，并使小鼠肌肉萎縮癥狀明顯改善。在雞受精卵中注射MSTN抗體，結(jié)果發(fā)現(xiàn)雞的體重增加，表明通過制備肌肉生長抑制素的拮抗物來阻斷其分子作用通路，可以有效的促進(jìn)動物肌肉的生長和發(fā)育，為改善肉類品質(zhì)開辟了一條新途徑。因此，本研究以抑制綿羊肌肉生長抑制素的功能為出發(fā)點，通過抗體技術(shù)制備MSTN多克隆抗體和納米抗體兩種途徑，探究一條促進(jìn)綿羊（肌肉）生長的途徑，為制備有效的促綿羊生長制劑奠定基礎(chǔ)。本文的主要研究內(nèi)容如下:1.克隆MSTN成熟肽基因，制備MSTN多克隆抗體并對其安全性和效果進(jìn)行檢測驗證：利用PCR克隆MSTN成熟肽基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體，獲得純化的目的蛋白，免疫新西蘭大白兔制備多克隆抗體，將其侵染綿羊肌肉細(xì)胞并通過檢測LD... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
目錄
前言
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 MSTN 基因的發(fā)現(xiàn)
    2 MSTN 的結(jié)構(gòu)與功能
    3 MSTN 基因的定位和同源性分析
    4 MSTN 的蛋白結(jié)構(gòu)
    5 MSTN 基因的表達(dá)
    6 MSTN 的生物學(xué)功能
    7 MSTN 基因的作用機(jī)制
    8 MSTN 在畜牧中的應(yīng)用研究
    9 MSTN 的應(yīng)用前景
第二章 實驗研究
    實驗一原核表達(dá)載體 pET-32a-MSTN 的構(gòu)建與表達(dá)
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 MSTN 成熟肽基因的克隆
            2.2 重組質(zhì)粒的鑒定
            2.3 重組表達(dá)載體 pET32a-MSTN 的構(gòu)建與鑒定
            2.4 MSTN 成熟肽蛋白的原核表達(dá)
            2.5 目的蛋白表達(dá)條件優(yōu)化
            2.6 MSTN 成熟肽蛋白的純化和 Western-blotting 分析
        3 討論
    實驗二 MSTN 多克隆抗體的制備與效果驗證
        摘要
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果
            2.1 MSTN 多克隆抗體的 ELISA 檢測
            2.2 毒性試驗細(xì)胞形態(tài)觀察
            2.3 細(xì)胞因子 LDH 水平檢測
            2.4 MSTN 抗體對羔羊生長的影響
        3 討論
第三章 MSTN 單域重鏈抗體噬菌體文庫的構(gòu)建與鑒定
    摘要
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果
        2.0 抗體效價的檢測
        2.1 RNA 的提取與分析
        2.2 VHH 基因的獲得
        2.3 pCANTAB-5E 載體與 VHH 連接轉(zhuǎn)化
        2.4 文庫的鑒定
    3 討論
        3.1 重鏈抗體可變區(qū)基因的克隆
        3.2 抗體庫的容量
第四章 試驗結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介及發(fā)表文章
導(dǎo)師評閱表


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3646485